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將RRBC加入正常人血清中,，可使B因子活化,，激活補(bǔ)體旁路途徑致使BRBC溶解,。將正常人新鮮血清加熱使B因子喪失活性（簡稱RB）,，旁路途徑不能激活，當(dāng)加入RRBC時不發(fā)生溶血,。此時再加入含有B因子的待測血清,，旁路途徑即被激活，RRBC發(fā)生溶血反應(yīng),。根據(jù)溶血程度可測定待測血清中B因子的活性,。

1．RRBC懸液制備（見ACH50測定）。

2．RB的制備 取新鮮正常人混合血清（3人以上）,，56℃水浴加熱15min,，滅活其中B因子，新鮮使用或分裝后凍干保存,。

3．取一定稀釋度的受檢血清與一定量的RB和1％RRBC懸液混合,，置37℃水浴30min，離心,，取上清用分光光度計429nm讀取吸光度（A）值,，以參考血清A值作為100％進(jìn)行換算,，低于60％者判定為B因子溶血活性降低,。