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補(bǔ)體遺傳多態(tài)性的檢測
閱讀:936 發(fā)布時間:2012-2-25補(bǔ)體遺傳多態(tài)性的檢測大多分二步進(jìn)行,,*步是用瓊脂糖高壓電泳或聚丙烯酰胺等電聚焦電泳將EDTA抗凝血漿通過凝膠電泳,根據(jù)分子量的大小,、所帶電荷的多少及等電點(p1)將血漿蛋白分開,。第二步是免疫固定或溶血鑒定,瓊脂糖高壓電泳或聚丙烯酰胺等電聚焦后,,在凝膠板上鋪上抗補(bǔ)體某一成分的抗血清,,使其與凝膠板上的抗原結(jié)合,形成分子量較大的免疫復(fù)合物沉淀嵌在凝膠孔中,,不易漂洗掉,,故稱免疫固定。將免疫固定后的凝膠板在生理鹽水中漂洗,,除去其他蛋白成分,。烤干,,考馬斯亮藍(lán)染色,。
依照第六屆補(bǔ)體定型會議標(biāo)準(zhǔn)或標(biāo)準(zhǔn)品,,判斷待測樣本補(bǔ)體的同種異型?;蛴萌苎▽⒅旅鬝RBC和缺乏某一補(bǔ)體成分的豚鼠血清或人血清混合,,傾倒在電泳完畢的凝膠板上,凝膠板上的待測補(bǔ)體成分使缺乏的補(bǔ)體成分得以補(bǔ)償,,酶反應(yīng)發(fā)生,,導(dǎo)致溶血反應(yīng),凝膠板上可出現(xiàn)待測樣本補(bǔ)體某一成分的溶血帶,。
補(bǔ)體C4有兩個基因座位,,分別為C4A、C4B,,兩者均表現(xiàn)高度的遺傳多態(tài)性,,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)30余種同種異型。C4遺傳多態(tài)性在人類淵源,、法醫(yī)鑒定及與疾病相關(guān)的研究領(lǐng)域受到極大的重視,。C4遺傳多態(tài)性的檢測方法可分兩種,一種是瓊脂糖高壓電泳加免疫固定,,另一種是瓊脂糖高壓電泳后加溶血覆蓋,。在有抗血清的情況下,使用前者簡單,、方便,、易行。僅在C4兩個基因座位不易辨別時才采用后者,。