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MTF比色法測定slL-1的生物活性
閱讀：1429 發(fā)布時間：2011-12-17四甲基偶氮唑鹽[3—（4.5-dimethylthiazol-2-Y1）-2,，5-diphenyltetmzolimnbromide，MTF）在活細胞線粒體的琥珀酸脫氫酶作用下,，被還原成藍黑色的MTr-甲脂,，形成MTr-甲鐕的量與細胞增殖程度呈正相關(guān)。故通過測定細胞形成MTF-甲鐕量,，可間接定量分析細胞的增殖情況,，具體步驟如下：
（1）用PBS溶解MTT為5mg／mL，用0．22／zm膜濾器除菌及雜質(zhì),。
（2）加MTF至培養(yǎng)的細胞及IL-1樣品中,，10uL／孔，37~C溫育4ho
（3）于每孔加酸化異丙醇100t~L／孔,，充分混勻以溶解底物,。酸性條件使培養(yǎng)液中酚紅指示劑變?yōu)辄S色，以利于對MTr-甲脂轉(zhuǎn)化物的測定,。
（4）將微量測定板置室溫數(shù)分鐘,，保證轉(zhuǎn)變的底物結(jié)晶被溶解。
（5）置酶標(biāo)儀,，調(diào)整檢測波長為570nm,，參考波長為630nm。測定應(yīng)在酸化異丙醇加入后1h內(nèi)完成,。