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近年來發(fā)展的RTPCR分子診斷技術(shù)具有高度的敏感性和特異性，可大大縮短對AIV病毒的檢出時(shí)間,，克服了傳統(tǒng)的禽流感診斷技術(shù)的缺點(diǎn)，為禽流感早期快速診斷提供子敏感、快速,、實(shí)用的方法。1986年,，Perdue用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）診斷禽流感,，從接種雞胚到出結(jié)果僅用時(shí)36h。

趙建梅等在傳統(tǒng)一步法RT-PCR擴(kuò)增各種病毒RNA的基礎(chǔ)上,，進(jìn)行了兩種病毒和三種病毒的一步法多重RT-PCR的試驗(yàn),，認(rèn)為此檢驗(yàn)方法在實(shí)際工作中也有較大的使用價(jià)值。一步法多元-PCP,是指在一個(gè)PCR反應(yīng)體系中同時(shí)設(shè)立2對或2對以上引物,，用于擴(kuò)增不同的目的片段,。目前這種方法可以同時(shí)檢測流感病毒的型和亞型。S．K．Poddar將67份樣品分成兩部分,，一部分用一步法多元PCR檢測,，另一部分用已經(jīng)建立好的單抗ELISA方法檢測，結(jié)果兩種方法之間有很好的吻合率,。

E．Starick認(rèn)為,，用RT-PCR方法可以鑒別高低致病力AIV。而C．Steininger認(rèn)為RT-PCR技術(shù)的靈敏度要高于病毒分離和ELISA,，可以避免一些錯(cuò)誤的陰性結(jié)果,。B．Herrmann報(bào)道用巢式RT-PCR同時(shí)檢測A、B流感,，從215份流感疑似病料中,，巢式RTPCR檢出8份，病毒分離檢出66份,，免疫熒光檢出68份陽性結(jié)果,。E．Starick報(bào)道，設(shè)計(jì)了一個(gè)H7亞型特異性的巢式RT-PCR,，擴(kuò)增片段包括了血凝素裂解位點(diǎn),，可以依據(jù)裂解位點(diǎn)變化確定強(qiáng)弱毒株，他認(rèn)為該方法與病毒的分離鑒定具有同樣的靈敏性,，檢出率更高,。

Y，Pang和M．LKhan等設(shè)計(jì)了分別針對雞傳染性支氣管炎病毒（1BV）,、傳染性喉氣管炎病毒（1LTV）,、新城疫病毒（NDV）,、雞毒支原體（MG）、雞滑液囊支原體（MS）和AIV 6對引物進(jìn)行的多重PCR反應(yīng),。在用瓊脂糖凝膠進(jìn)行檢測35輪PCR產(chǎn)物時(shí)發(fā)現(xiàn)檢出的敏感度DNA或RNA的量對IBV,、AIV、MG和ILTV為long左右,，對NDV和MS為100ng左右,。該方法也適用于各種病原的混合感染時(shí)的病料。

國內(nèi)謝芝勛等參考禽流感病毒M基因和HA基因序列設(shè)計(jì)了3對引物,，其中1對為針對不同HA亞型AIV的通用引物,，另外2對為分別針對H5和H7亞型的特異性引物，通過對多重RT-PCR擴(kuò)增條件的優(yōu)化‘,，成功建立了快速檢測鑒別AIV H5,、H7亞型的多重RT-PCR方法。該多重RT-PCR特異性好,，對AIV不同亞型RNA的zui低檢測量為10pg,，對AIVH5和H7亞型RNA的zui低檢出量為100pg。不需要對病原體進(jìn)行分離增殖,，就可對臨床疑似AIV感染的樣品或環(huán)境樣品進(jìn)行直接檢測鑒別,，避免了進(jìn)行AIV分離增殖過程中散毒和傳播等風(fēng)險(xiǎn)。該多重RT-PCR快速檢測鑒別AIVH5,、H7亞型技術(shù)的建立，對AIV高致病性H5,、H7亞型感染的診斷及制定有效的防治措施具有實(shí)用價(jià)值和指導(dǎo)意義,。