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檢測炭疽免疫電化學與磁珠免疫熒光法
閱讀:807 發(fā)布時間:2011-7-6ECLIA基于電極表面Ru(bpy)2+3標記抗體與過量TPA反應(yīng)產(chǎn)生光子的氧化還原反應(yīng)原理,。整個反應(yīng)發(fā)生于磁珠與正極附近區(qū)域內(nèi),。炭疽芽孢桿菌檢測范圍為102一104CFU,。捕獲抗體通過生物素2鏈親和素作用固定于磁珠表面,。MPFIA應(yīng)用抗體包被的磁珠作為固相基質(zhì),懸浮于溶液中,,供菌體捕獲,,整個反應(yīng)在微孔板中進行。這樣捕獲抗體一細菌一堿性磷酸酶標記抗體形成夾心,,后者又作為報告者與堿性磷酸酶底物At-tophosTM發(fā)生反應(yīng),,產(chǎn)生熒光,從而達到檢測之目的,。ECLIA較MP-FIA敏感性至少高10倍,。二者與傳統(tǒng)的ELISA相比優(yōu)勢在于:
①磁珠表面積大,抗體固定密度高;
②磁珠懸浮于溶液中,,加快抗原-抗體反應(yīng)速度,;
③臨床和生物樣品中靶細菌可直接被捕獲、分離,,甚至在磁珠表面濃縮。
免疫檢測方法為研制炭疽芽孢桿菌檢測儀器提供了較大的空間,,但還受到抗體數(shù)目,、自然和基因工程變異的限制。大多數(shù)免疫學檢測方法靈敏度尚不能滿足軍事上1~100個細菌的需要,。Dang等研究了芽孢滅活方法對檢測的影響,。在直接ELISA中,無論是用多抗,,還是用單抗,,檢測丁射線滅活芽孢的信號都降低了近50%,而對高壓滅活的芽孢,,用單抗檢測信號降低了83%,,用多抗檢測信號增加了3倍,說明多抗以可溶性抗原-抗體為主,,而單抗結(jié)合位點對高壓和丁射線均敏感,。由此可見,不同芽孢滅活方法影響著核酸與免疫學檢測結(jié)果,,在比較不同實驗室結(jié)果時需加以考慮,。在標本處理時,需考慮死芽孢與活芽孢的檢測對比問題,,尤其是在高度可疑而檢測陰性時,,一定要進行檢測活芽孢試驗的對比。這一試驗還證明了滅活的芽孢檢測不會導(dǎo)致假陽性,。