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技術(shù)文章

特異性神經(jīng)元抗核抗體(Hu抗體)的檢測

閱讀:622          發(fā)布時間:2011-6-30

某些神經(jīng)系統(tǒng)綜合征是由于惡性腫瘤的遠(yuǎn)隔影響所造成,,稱為神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤綜合征(paraneoplasticsyndromesofthenervoussystem,,PNSNS),。近年來由于發(fā)現(xiàn)了特異性的神經(jīng)元抗核抗體(Hu抗體),,因而認(rèn)為此病與自身免疫有關(guān)。Hu抗體實質(zhì)上為多克隆IsC,,能固定補(bǔ)體,可與中樞神經(jīng)系統(tǒng)及周圍神經(jīng)系統(tǒng)中所有神經(jīng)元胞核及小細(xì)胞肺癌細(xì)胞核起反應(yīng),,但不與其他組織細(xì)胞(如腦膠質(zhì)細(xì)胞,,肝、腎等組織細(xì)胞)發(fā)生反應(yīng),,并與SLE等結(jié)締組織疾病所產(chǎn)生的非特異性抗核抗體有本質(zhì)上的差別,,因此,稱為特異性神經(jīng)元抗核抗體(Hu抗體),。采用免疫熒光,、ELISA法即可測出患者血清中Hu抗體。陳齊鳴等(1996)報道采用先進(jìn)的親合免疫細(xì)胞組織化學(xué)ABC法和免疫印跡技術(shù)檢測PNSNS患者的Hu抗體,,其敏感性和特異性顯著增高?,F(xiàn)介紹親合免疫細(xì)胞組織化學(xué)ABC法檢測Hu抗體。

1.操作步驟
(1)6/1m正常人大腦額葉,、顳葉,、肝臟、腎臟及Wistar大鼠的大腦,、小腦的冰凍切片干燥10min,。
(2)丙酮固定10min后用含0.3%H202、1%BSA的PBS處理10min,,抑制內(nèi)源性過氧化物酶,。
(3)加10%羊血清/PBS封閉30min后,分別加稀釋的血清,、腦脊液或尿液標(biāo)本在4℃冰箱過夜,。
(4)PBS洗5min,更換3次,,以下同,。加適度稀釋的生物素標(biāo)記羊抗人IeC(第二抗體),37℃孵育15min,。
(5)同上洗滌,,加ABC復(fù)合物室溫作用15min。
(6)同上洗滌,,DAB-H202底物顯色后,,常規(guī)封片鏡檢。

2.結(jié)果顯示
(1)PNSNS患者的血清、腦脊液及尿液中的Hu抗體與正常人和Wistar大鼠所有神經(jīng)組織中的神經(jīng)元胞核形成均勻染色,,核仁陰性,,但不與神經(jīng)組織中的膠質(zhì)細(xì)胞、肝臟及腎臟組織細(xì)胞發(fā)生反應(yīng),,說明該法具有高度特異性,。
(2)血清及腦脊液中Hu抗體的滴度zui高可達(dá)1:64 000及1:4 000,尿液中Hu抗體滴度達(dá)到1:200,,說明該法敏感性很高,。
(3)以免疫印跡技術(shù)測得17例患者血清中的抗體識別神經(jīng)元胞核中蛋白抗原分子量為350-400kD。

3.臨床意義 通常認(rèn)為,,IgC不能從腎小球濾過,,尿中測出IgC型Hu抗體,可能是Hu抗體損害了腎小球,,使其通透性增加所致,。腦脊液Hu抗體滴度與血清中的抗體滴度無關(guān)聯(lián),提示可能有CNS中的局部合成,。有76%(13/17)患者以PNSNS起病,,并檢出Hu抗體,爾后發(fā)現(xiàn)原發(fā)灶,,說明Hu抗體的測定對于部分癌腫,,特別是小細(xì)胞肺癌的早期診斷有實際臨床意義。
 

 

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