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    膠體金粒子在pH值接近蛋白質(zhì)的pI時(shí),，二者容易形成牢固的結(jié)合物,。膠體金粒子可以廣泛地與抗免疫球蛋白抗體,、蛋白A,、鏈霉親合素等結(jié)合,。由于結(jié)合的蛋白可與金粒子緩慢地分離,，因此,，膠體金試劑在使用前應(yīng)該通過(guò)洗滌去除游離蛋白。

 

    金標(biāo)記zui初用于電子顯微鏡研究，但亦可用于光學(xué)顯微鏡,，得到比酶標(biāo)記方法較高的分辨率,，而且，可避免底物的準(zhǔn)備及內(nèi)源性酶活性干擾等問(wèn)題,。金標(biāo)記在光學(xué)顯微鏡水平雖缺乏敏感性,，但應(yīng)用光化銀增強(qiáng)顯影方法克服了這一問(wèn)題。

 

    非擴(kuò)大的金標(biāo)記可直接用于光學(xué)顯微鏡檢測(cè),，在明視野下,，依據(jù)反應(yīng)強(qiáng)度的不同，標(biāo)記范圍從淡粉色到深紅色,，Nomarski不同的干擾與光學(xué)顯微鏡形成對(duì)照,，使標(biāo)記物呈現(xiàn)深紅色到黑色。使用銀增強(qiáng)方法,，金粒子由金屬銀包被形成一種黑褐色標(biāo)記物,，通過(guò)明視野極易觀測(cè)。膠體金標(biāo)記方法可與許多組織化學(xué)染色方法相配合,。金標(biāo)記反應(yīng)亦很容易控制,，因?yàn)槿旧某尸F(xiàn)過(guò)程可在光學(xué)顯微鏡下直接監(jiān)測(cè)，并可有控制地繼續(xù)進(jìn)行,。

 

    1．需要的溶液和特殊設(shè)備

    0．5mol／L的枸櫞酸鈉（pH3．5） 5．6％羥苯醌（避光保存）,；

    0．73％乳酸銀（避光保存）；

    1％乙酸

    標(biāo)準(zhǔn)的固定液,。

    檢測(cè)用的暗室,，光學(xué)顯微鏡（通常帶有照相機(jī)以便于記錄結(jié)果）。

 

    2．操作步驟

    （1）在蒸餾水中短暫地漂洗標(biāo)本片,，標(biāo)本片可以在染色后直接檢測(cè)或者用銀增強(qiáng)處理后觀察,，用Gelvattol或者M(jìn)owiol封片；

    （2）銀增強(qiáng)方法,，轉(zhuǎn)移樣本到暗室中,。檢測(cè)劑的準(zhǔn)備：混合2份0．5mol／L枸櫞酸鈉（pH3．5），3份5．6％羥苯醌和12份水,。使用前再直接加3份0．73％乳酸銀,；

    （3）將金標(biāo)記物處理的標(biāo)本片浸泡于此檢測(cè)液中，室溫孵育2～3min,；

    （4）用1％乙酸短暫地漂洗,，并在標(biāo)準(zhǔn)攝影固定液中固定數(shù)分鐘；

    （5）優(yōu)化：如果需要,，進(jìn)行復(fù)染,；

    （6）樣品用DPX封片。