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離子交換法分離與純化蛋白質(zhì)
閱讀:3784 發(fā)布時(shí)間:2010-12-30 蛋白質(zhì)和酶都具有電解質(zhì)性質(zhì),,故可用離子交換劑進(jìn)行分離提純,,特別是經(jīng)過(guò)了初步純化后的蛋白質(zhì)和酶采用此法效果尤為顯著,。有關(guān)離子交換劑及其使用技術(shù),,參閱有關(guān)專(zhuān)著,,這里介紹近年來(lái)以纖維素衍生物作為離子交換劑純化蛋白質(zhì)及酶的方法。在這類(lèi)衍生物中以二乙氨基乙基纖維素(簡(jiǎn)稱(chēng)DEAE-纖維素,,為陰離子交換劑)及甲基纖維素(簡(jiǎn)稱(chēng)CM-纖維素,,為陽(yáng)離子交換劑)應(yīng)用zui廣泛。
DEAE-纖維素是纖維素結(jié)構(gòu)中的氫原子被一定量的二乙氨基-乙基取代而成弱堿性化合物,,它作為陰離子交換劑的原理是:
在實(shí)際工作中常用磷酸緩沖液平衡DEAE-纖維素后,,才對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行交換吸附的,故上式B-可視為PO3-,。用DEAE-纖維素吸附酶和蛋白質(zhì)時(shí)常用pH為7~9,,然后提高鹽濃度(使蛋白質(zhì)與交換劑的結(jié)合鍵減弱)或降低pH使之洗脫,,洗脫后的蛋白質(zhì)溶液有時(shí)可進(jìn)一步上CM-纖維素柱純化。
A+可為H+或Na+,,視平衡CM-纖維素時(shí)所用溶劑而定,。CM-纖維素常選在pH4.5~6.0左右吸附蛋白質(zhì),然后提高pH或鹽濃度進(jìn)行洗脫,。離子交換纖維素對(duì)大分子物質(zhì)有較大交換量,,例如CM-纖維素對(duì)血紅蛋白的交換量為93~98mg/100mgCM-纖維素。此外,,纖維素離子交換劑還具有層析條件溫和,、物質(zhì)易于洗脫、分辨力強(qiáng),、被分離的蛋白質(zhì)不易變性等優(yōu)點(diǎn),。
除了纖維素離子交換劑外,離子交換凝膠也是目前應(yīng)用于分離蛋白質(zhì)和酶的一種很好的離子交換劑,。常用的有DEAE-葡聚糖凝膠和CM-葡聚糖凝膠,。離子交換凝膠不僅具有交換當(dāng)量高,、層析條件溫和,、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),而且兼具分子篩的性能,,在梯度洗脫時(shí),,對(duì)不同分子量的蛋白質(zhì)具有很高的分辨能力。