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以毛細管轉(zhuǎn)移方式進行北方轉(zhuǎn)印實驗
閱讀：728 發(fā)布時間：2010-12-30要進行北方雜合反應(yīng)前,，必須先將RNA自洋菜膠體轉(zhuǎn)移至硝化纖維紙（nitrocellulose membrane） 或尼龍膜 （nylon membrane） 上,，這一個過程稱為轉(zhuǎn)印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛細管轉(zhuǎn)移法 （capillary transfer）,、真空轉(zhuǎn)移法 （vacuum transfer） 與電轉(zhuǎn)印法 （electroblotting）,。 毛細管轉(zhuǎn)移法借助吸水紙吸收轉(zhuǎn)移緩沖液時所產(chǎn)生的牽引力量將RNA自洋菜膠體轉(zhuǎn)移至膜上；要轉(zhuǎn)印*,，起碼需要作用6 h以上,。 雖然所需花費的時間比較長，以其不須要特別的儀器設(shè)備,，毛細管轉(zhuǎn)移法目前仍被普遍采用。 若分析RNA時采用變性聚丙烯酰胺膠體電泳,，則必須以電轉(zhuǎn)印法進行RNA轉(zhuǎn)印,。至于膜的選擇，硝基纖維素膜的優(yōu)點是比較不會產(chǎn)生非專一性反應(yīng),；不過其一旦被潤濕再烘干的后,，容易碎裂，不適用于進行多次雜合反應(yīng),。 尼龍膜的優(yōu)點是韌性好,，與核酸結(jié)合的能力也相當強，正可以彌補硝基纖維素膜的缺點,，現(xiàn)已成為主流,。 一旦將RNA轉(zhuǎn)移至膜上后，即可以利用紫外線照射法 （uv irradiation） 或真空干燥法 （在真空下80℃加熱2 h） 將其固定于轉(zhuǎn)印膜上,。
儀器用具：塑料盒,；玻璃板；裁紙刀
藥品試劑：20×SSC （3 M NaCl, 300 mM sodium citrate）,；尼龍膜,；3MM 濾紙；吸水紙,；dH2O/DEPC
方法步驟：
1） 將甲醛洋菜膠體移放在塑料盒內(nèi),，以dH2O/DEPC沖洗數(shù)次,，以便去除甲醛。
?? 注意：在移動膠體時請?zhí)貏e留心,，不要把膠體弄破了,！
2） 注入100 mL 20×SSC，靜置5 min,。
3） 根據(jù)圖所示,，依序在塑料盒上堆棧玻璃板、濾紙 （作為鹽橋）,、電泳膠,、尼龍膜、三層濾紙,、與吸水紙,，以便以毛細管轉(zhuǎn)移方式將RNA 轉(zhuǎn)印于尼龍膜上；塑料盒內(nèi)裝入適量20×SSC,，以便作為轉(zhuǎn)移緩沖液,。
以毛細管轉(zhuǎn)移法進行核酸轉(zhuǎn)印
?? 注意：
a. 濾紙與尼龍膜應(yīng)先以20×SSC 潤濕，再用于堆棧,。
b. 在濾紙,、尼龍膜、與電泳膠夾層間可能會有氣泡存在,，因此在放好電泳膠,、尼龍膜或濾紙后，應(yīng)立即檢視,，并以食指輕輕平移的方式小心趕走氣泡,。
c. 此轉(zhuǎn)印步驟將持續(xù)至隔天才結(jié)束。