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抗精子抗體（antispermatozoa antibody,，ASA）檢測
閱讀：617 發(fā)布時間：2010-12-18男性體內的血睪屏障可使精子與免疫系統(tǒng)隔離。但當此種屏障因疾病或創(chuàng)傷而受損時,，精子或其可溶性抗原逸出,，可導致機體產生自身抗精子抗體（antispermatozoa antibody，ASA）,，從而抑制精子產生,，造成男性不育。女性生殖道具有酶系統(tǒng),，能降解進入的精子抗原,，使其不能達免疫系統(tǒng)。此種酶系統(tǒng)的缺陷可使精子抗原保持完整而刺激同種抗精于抗體產生,。大約10％～30％原因不明的女性不孕癥可能由于ASA所致,。
測定ASA的方法很多，目前常用的有熒光抗體法,，淺盤微量凝集法,，伊紅Y染色法，試管或玻片凝集法,，固相酶染色法,，免疫珠法，免疫洗選法（panning法）及ELISA法等,。這些方法各有利弊,，都不能*臨床快速診斷的要求。莊南等（1991）在ELISA反應系統(tǒng)中,，加入適量的PEG,，可使每步反應時間在10min內完成，同時用DW-T快速沖洗代替常規(guī)的PBS-T洗滌方法,，從而能在40rain內完成檢驗,。且該法有較高特異性和精密度，適用于常規(guī)工作?，F(xiàn)介紹快速ELISA法檢測抗精子抗體,。
1．試劑 ①人精子膜抗原：取20份正常生育男性的精液,，液化后，用PBS洗5次,，沉淀的精子混懸于含0．5％NP-40（FLUKA）的Tris-HCl緩沖液中,，4℃1h，17 000Xg離心30min,，取上清液測定蛋白量,，即為精子膜抗原；②HRP標記的羊抗人丁球蛋白,；③4％和8％PEG-PBST緩沖液：0．01mol／L,，pH7．4PB加入NaCl達0．85％，Tween-20為0．05％及PEG6000為4％或8％,。
2．操作步驟 將精子膜抗原用包被液按1：100稀釋,，包被反應板微孔，每孔100uL,，4℃過夜,，用含0．05％Tween-20的蒸餾水（DW-T）洗3次，每孔加待測血清50uL,，同時設性,、陽性和空白對照孔，43℃10rain,，DW-T洗3次后,，加zui適工作濃度的HBP標記的抗人γ球蛋白（用含0％小牛血清的4％PEG-PBST作1：1 000稀釋），每孔100uL,，43℃10min,；DW—T洗3次，加底物（OPD-H202）溶液,，每孔100yL,，37％10min使呈色，用2mol／LH2S04 50gL終止反應,，測492nm波長吸光度值（A）,，以P／N≥2．1為陽性。
3．臨床意義 ASA的檢出率因采用的檢測方法不同,，結果也不一致。通常不育者血清中ASA檢出率在10％—30％左右,。尤其是梗阻性無精癥病人,，ASA陽性率可高達60％。ASA的出現(xiàn)以及滴度升高是造成免疫性不育,、不孕的根本原因,，因而ASA的檢測對不育的臨床治療和預后的判斷提供了有價值的指標。