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1. 沒有回收到DNA片段
如在洗脫后,，發(fā)現(xiàn)洗脫液中沒有DNA 片段,，請(qǐng)檢查是否按瓶身標(biāo)簽，在洗滌液中加入了無(wú)水乙醇,。
 

2. 提取率低
1） 融膠液為酸性緩沖液,，如融膠后，其pH 值升高將影響提取得率,。請(qǐng)加入0.1 倍體積的3M 乙酸鉀（pH5.0）,。
2） 長(zhǎng)時(shí)間使用后沒有更換的電泳緩沖液，其pH 值較高,，將影響DNA 的吸附,。請(qǐng)更換新的電泳緩沖液后，再進(jìn)行電泳,，然后切膠,。
3） 回收片斷大小影響回收效率（見下圖）；
4） 在洗脫前，將洗脫液于30～60℃溫浴,，可提高提取效率適當(dāng)延長(zhǎng)洗脫時(shí)間可增加回收效率,。
5） 正確估計(jì)膠大小，確保加入足夠量的Binding Buffer,；使膠*融解,；
6） 提高Binding Buffer用量可提高小片斷DNA回收效率.對(duì)于<100bp的DNA片斷,可加入6倍體積的Binding Buffer；

3. 吸光度測(cè)量結(jié)果問題
吸光度測(cè)量的是未知樣品與調(diào)零標(biāo)準(zhǔn)之間的相對(duì)吸光度,，所以請(qǐng)用與洗脫液體相同的液體,，對(duì)測(cè)量樣品進(jìn)行稀釋和調(diào)零。

4.如何計(jì)算提取率
1） 由于回收前樣品中,，往往含有非目的DNA 片段,、引物、dNTP 等,，所以不能用測(cè)回收前后吸光度的的方法計(jì)算回收率,。
2） 可將回收前后DNA 片段一起電泳，使用凝膠成像系統(tǒng)拍照后,，用配套的軟件進(jìn)行電泳條帶灰度對(duì)比,。
3） 注意，電泳條件及拍攝條件將對(duì)灰度對(duì)比結(jié)果造成很大影響,，請(qǐng)仔細(xì)操作,，以減小誤差。

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