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Southern 轉(zhuǎn)印分析
閱讀：338 發(fā)布時(shí)間：2010-11-25在膠體中的DNA 可利用毛細(xì)現(xiàn)象的作用將DNA 牽引轉(zhuǎn)印至覆蓋在膠片上的濾膜,，經(jīng)烘烤或UV 照射后,，可使DNA 固定在膜上，以進(jìn)行探針的雜合（hybridization） 反應(yīng),。
儀器用具：
玻璃缸;玻璃板或吸水海綿;Crosslinker （Stratalinker 1800, Stratagene）
藥品試劑：
10×SSC （1.5 M NaCl; 0.15 M sodium citrate） 或20×SSC
變性溶液 （1.5 M NaCl; 0.5 N NaOH）
中和溶液 （1 M Tris-Cl; 1.5 M NaCl, pH 7.5）
Nylon membrane 尼龍膜
40 Methods in Biotechnology Vol 1
Whatman 3MM 濾紙
吸水紙
方法步驟：
1） 電泳的洋菜膠片,，浸于0.25 N HCl 中15 min （當(dāng)DNA 分子量不大時(shí)，可省去此步驟）,；以無菌水潤洗膠片后,，將膠片置于變性溶液中，于室溫緩慢震蕩15 min,，更換新的變性溶液后再處理15 min,。
2） 以無菌水潤洗膠片，再以中和溶液浸泡30 min,，其間更換一次,。
3） 戴手套將尼龍膜剪裁成膠體大小，在角落剪一缺口作記號(hào),。另裁剪數(shù)張較膠片稍小的3MM 濾紙,。
4） 取一玻璃缸，加入10×SSC,。將一塊長形玻璃板架在缸上,，裁剪一張長形3MM 濾紙,，寬度須略大于膠片，將濾紙置于玻璃板上,，使濾紙兩端順著玻璃板垂入缸內(nèi)溶液中,。加一些10×SSC 于濾紙上使其濕透，并趕掉濾紙與玻璃板間的氣泡,。
?? 若有3~5 cm 厚的干凈海綿,，則可取代玻璃板?？蓪⒑＞d置于缸中,，加入10×SSC，但不可淹過海綿,。海綿濕透后,，其上放一張比膠片大的3MM 濾紙,，要趕掉濾紙與海綿間的氣泡,。
5） 將處理過的膠片置于濾紙上，趕掉氣泡,，小心將尼龍膜蓋在膠片上,，不要有氣泡產(chǎn)生。 再依序蓋上兩張以10×SSC 浸濕的濾紙及兩張干的濾紙,，并以保鮮膜將膠片四周封住,。zui后覆蓋一迭吸水紙，上面放一塊玻璃板或塑料板,，以重物壓住即可,。在室溫下靜置過夜。
6） 轉(zhuǎn)印后,，小心移去重物,、吸水紙、3MM 濾紙等,，在尼龍膜相對(duì)于樣品槽的位置作記號(hào),。將尼龍膜掀開，與膠片接觸面朝上,，置于10×SSC中緩慢震蕩5 min,，以洗去附著在膜上的洋菜膠。 轉(zhuǎn)印后的膠片可再以EtBr 染色,，視是否轉(zhuǎn)印*,。
7） 將尼龍膜置于干凈的濾紙上 （與膠片接觸面朝上），移至UV crosslinker中,，進(jìn)行crosslinking 以將DNA 固定在膜上,。
8） 干燥后的尼龍膜即可進(jìn)行雜合,。 若不立即進(jìn)行雜合，可將尼龍膜夾于兩張濾紙間,，置于干燥箱中存放,。