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ELISA等免疫學(xué)方法檢測(cè)飼料中的動(dòng)物源性成分
閱讀：825 發(fā)布時(shí)間：2010-11-2免疫學(xué)方法用于物種的鑒定已有很長(zhǎng)的歷史，早在20世紀(jì)初建立在特異性抗體—抗原反應(yīng)之上的免疫學(xué)方法就已經(jīng)被應(yīng)用于肉的種類鑒別,，現(xiàn)在已有多種試劑盒被研發(fā)出來用于飼料中動(dòng)物源性成分的檢測(cè),。其主要原理是應(yīng)用抗原與抗體的特異性結(jié)合，即用一個(gè)物種的特異性抗原制作特異性抗體,，然后用此抗體檢測(cè)樣品中有無特異性的抗原進(jìn)而用于檢測(cè)樣品中有無此物種的成分存在,。然而，肉骨粉一般都要經(jīng)過高溫高壓處理,，在這個(gè)過程中許多蛋白質(zhì)都發(fā)生了變性,，失去了抗原性和水溶性,，這就給檢測(cè)帶來了困難,。
為了使用免疫學(xué)方法鑒定動(dòng)物成分的種類，必須選擇合適的動(dòng)物種類標(biāo)記作為抗原,，其中肌肉組織的蛋白質(zhì)具有較高的價(jià)值,，應(yīng)用針對(duì)肌肉組織特異性蛋白的單克隆抗體建立的免疫檢測(cè)方法能夠檢測(cè)肌肉組織，而不會(huì)與血液和包括牛奶,、蛋清,、蛋黃等在內(nèi)的食品蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。目前已發(fā)現(xiàn)幾種熱穩(wěn)定的蛋白質(zhì)可以作為檢測(cè)的目的蛋白,，其中包括肌鈣蛋白TnI,。Hsieh等成功地研制了針對(duì)TnI的幾種不同單克隆抗體，運(yùn)用這些單抗建立了鑒定哺乳動(dòng)物,、反芻動(dòng)物和單個(gè)動(dòng)物（如豬,、雞）的ELISA方法，可以對(duì)經(jīng)過熱處理的動(dòng)物組織成分進(jìn)行檢測(cè),，針對(duì)TnI的單抗可以檢測(cè)出經(jīng)過132~C 2h處理的肌肉而不降低效果,。建立在TnI特異性單抗基礎(chǔ)上的夾心ELISA已經(jīng)應(yīng)用于禁止動(dòng)物蛋白如反芻動(dòng)物,、哺乳動(dòng)物和所有動(dòng)物種類的檢測(cè)上。
ELISA方法由于它具有簡(jiǎn)單,、特異和靈敏度高的優(yōu)點(diǎn),，被廣泛應(yīng)用于食品和飼料中的肉類品種鑒別，并且ELISA不需要大型的科學(xué)設(shè)備,，容易操作,，可以進(jìn)行大規(guī)模檢測(cè)。然而檢測(cè)的成功應(yīng)首先建立在有可靠的捕獲抗原的檢測(cè)抗體之上,。多抗和單抗都曾經(jīng)應(yīng)用在各種ELISA檢測(cè)中,，zui近一些針對(duì)熱處理穩(wěn)定的動(dòng)物蛋白的單抗被研制出來，一旦獲得價(jià)的單抗就可以進(jìn)行長(zhǎng)期穩(wěn)定的大量制備,。
夾心ELISA適合于樣品的檢測(cè),，應(yīng)用廣泛，已經(jīng)有多種商品試劑盒被開發(fā)出來,，如ELISATechnologies公司的MELlSA—TEKMeatSpeciesKit可以對(duì)肉骨粉,、飼料、烹飪過的和生肉中的反芻動(dòng)物成分和豬肉成分進(jìn)行檢測(cè),，靈敏度zui低可以達(dá)到0．05％,。
可以進(jìn)行快速診斷的免疫試劑條試劑盒（1ateralflow strip test kit）也被開發(fā)出來，如Neogen公司的Revealruminantfeed／MBM,，可以對(duì)飼料或肉骨粉中的反芻動(dòng)物成分進(jìn)行檢測(cè),，可以在十幾分鐘內(nèi)得到結(jié)果。
免疫測(cè)定快速,，操作簡(jiǎn)單,，不需要對(duì)工作人員進(jìn)行特殊的培訓(xùn)。例如上面提到的試紙條只要求將肉骨粉煮10rain在一種緩沖液中,，然后將試紙條在這種溶液中放置lOmin,，即可以讀取結(jié)果。下一步研究的重點(diǎn)是進(jìn)一步開發(fā)更有效的抗體和從飼料中提取蛋白的方法,?？傊裘舾行院吞禺愋远寄苓_(dá)到要求,，免疫學(xué)方法從它的實(shí)用性上可以被看作為篩選方法,，然而需要其他更的方法來確定被檢樣品結(jié)果的有效性。