1 范圍
本方法規(guī)定了食品中亞硝酸鹽的快速檢測方法,。
本方法適用于肉及肉制品（餐飲食品）中亞硝酸鹽的快速測定。
2 原理
樣品中的亞硝酸鹽經(jīng)提取后,，在弱酸性條件下與對氨基苯磺酸重氮化后,，再與鹽酸萘乙二胺反應(yīng)生成紫紅色偶氮化合物，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與亞硝酸鹽含量成正相關(guān),，通過色階卡進(jìn)行目視比色,，對樣品中亞硝酸鹽進(jìn)行定性判定。
3 試劑和材料
除另有規(guī)定外,，本方法所用試劑均為分析純,，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。
3.1 試劑
3.1.1 對氨基苯磺酸,。
3.1.2 鹽酸萘乙二胺,。
3.1.3 鹽酸。
3.1.4 鹽酸（20%）：量取20mL鹽酸,，用水稀釋至100mL,。
3.1.5 對氨基苯磺酸溶液（4g/L）：稱取0.4g對氨基苯磺酸，溶于100mL20%鹽酸中,，混勻,，置棕色瓶中，臨用新制,。
3.1.6 鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L）：稱取0.2g鹽酸萘乙二胺,，溶解于100mL水中，混勻,，置棕色瓶中，臨用新制,。
3.2 參考物質(zhì)
亞硝酸鈉參考物質(zhì)中文名稱,、英文名稱、CAS號,、分子式,、相對分子質(zhì)量見表1，純度≥99%,。
表1 亞硝酸鈉中文名稱,、英文名稱,、CAS登記號、分子式,、相對分子質(zhì)量
中文名稱
英文名稱
CAS登錄號
分子式
相對分子質(zhì)量
亞硝酸鈉
Sodiumnitrite
7632-00-0
NaNO2
69.00
3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)工作液（200μg/mL,，以亞硝酸鈉計）：精密稱取適量經(jīng)110℃—120℃干燥恒重的亞硝酸鈉參考物質(zhì)（3.2），加水溶解,，移入250mL容量瓶中,，加水稀釋至刻度，混勻,。
3.4 材料
亞硝酸鹽快速檢測試劑盒：適用基質(zhì)為肉及肉制品,，需在陰涼、干燥,、避光條件下保存,。
4 儀器和設(shè)備
4.1 移液器：200μL，1mL,。
4.2 渦旋混合器或超聲儀,。
4.3 電子天平或手持式天平：感量為0.01g和0.0001g。
4.4 離心機,。
4.5 微孔濾膜：0.45μm（水系）,。
5 分析步驟
5.1 試樣制備
取適量有代表性樣品的可食部分，充分粉碎混勻,。
5.2 試樣的提取
準(zhǔn)確稱取試樣1g（精確至0.01g）,，置于離心管中，準(zhǔn)確加水10mL,，超聲或渦旋振蕩提取5min,，靜置10min。準(zhǔn)確吸取1mL上清液（如樣品渾濁,，≥3000r/min離心5min取上清液,，或經(jīng)微孔濾膜過濾后取續(xù)濾液）于檢測管中，向檢測管中滴加對氨基苯磺酸溶液200μL,，混勻靜置1min,，再加入鹽酸萘乙二胺溶液100μL，混勻靜置5min,，即得待測液,。
5.3 測定步驟
將待測液與標(biāo)準(zhǔn)色階卡目視比色，10min內(nèi)判讀結(jié)果,。進(jìn)行平行試驗,，兩次測定結(jié)果應(yīng)一致，即顯色結(jié)果無肉眼可辨識差異。
5.4 質(zhì)控試驗
每批樣品應(yīng)同時進(jìn)行空白試驗和質(zhì)控樣品試驗（或加標(biāo)質(zhì)控試驗）,。用色階卡和質(zhì)控試驗同時對檢測結(jié)果進(jìn)行控制,。
5.4.1 空白試驗
稱取空白樣品，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作,。
5.4.2 質(zhì)控樣品試驗（或加標(biāo)質(zhì)控試驗）
亞硝酸鹽質(zhì)控樣品：采用典型樣品基質(zhì)或相似樣品基質(zhì)按照實際生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的,，含有一定量亞硝酸鹽，并可穩(wěn)定保存的樣品,。經(jīng)參比方法確認(rèn)的質(zhì)控樣品中亞硝酸鹽含量（以亞硝酸鈉計）應(yīng)包括但不限于10mg/kg,。
加標(biāo)質(zhì)控樣品：準(zhǔn)確稱取空白試樣1g（精確至0.01g），置于離心管中,，加入適量亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)工作液（200μg/mL）（3.3）使樣品中亞硝酸鈉含量為10mg/kg,。
質(zhì)控樣品（或加標(biāo)質(zhì)控樣品）按5.2和5.3步驟與樣品同法操作。
6 結(jié)果判定要求
觀察檢測管中樣液顏色,，與標(biāo)準(zhǔn)色階卡比較判讀樣品中亞硝酸鹽（以亞硝酸鈉計）的含量,。顏色淺于檢出限（1mg/kg）則為陰性樣品；顏色深于10mg/kg則為陽性樣品,。色階卡見圖1,。
注：1.顏色接近或深于1mg/kg，但淺于或接近10mg/kg時,，則考慮本底污染或帶入所
2.10mg/kg僅作為本方法的本底控制限,。
圖片
圖1 亞硝酸鹽色階卡
質(zhì)控試驗要求：空白試驗測定結(jié)果應(yīng)為陰性，質(zhì)控樣品試驗測定結(jié)果應(yīng)在其標(biāo)示量值允差范圍內(nèi),，加標(biāo)質(zhì)控試驗測定結(jié)果應(yīng)與加標(biāo)量相符,。
7 結(jié)論
由于色階卡目視判讀存在一定誤差，為盡量避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果,，讀數(shù)時遵循就高不就低的原則,。當(dāng)測定結(jié)果大于10mg/kg時，應(yīng)對結(jié)果進(jìn)行確證,。
8 性能指標(biāo)
8.1 檢測限：1mg/kg,。
8.2 靈敏度：靈敏度應(yīng)≥99%
8.3 特異性：特異性應(yīng)≥85%。
8.4 假陰性率：假陰性率應(yīng)≤1%,。
8.5 假陽性率：假陽性率應(yīng)≤15%,。
注：性能指標(biāo)計算方法見附錄A。
9 其他
本方法所述試劑,、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便,，在使用本方法時不作限定。方法使用者在使用替代試劑,、試劑盒或操作步驟前，須對其進(jìn)行考察，應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項性能指標(biāo),。
本方法參比方法為GB 5009.33-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定—第二法分光光度法》,。
待測樣品中若存在高含量的亞硫酸氫鈉、抗壞血酸或醬油時,，會對本法的顯色結(jié)果產(chǎn)生一定影響,，檢測時應(yīng)予以注意。
色階卡應(yīng)確保在試劑盒保質(zhì)期內(nèi)不出現(xiàn)褪色或變色的情況,。
附錄A
快速檢測方法性能指標(biāo)計算表
表A.1 性能指標(biāo)計算表
樣品情況a | 檢測結(jié)果b | 總數(shù) | |
陽性 | 陰性 | ||
陽性c | N11 | N12 | N1.=N11+N12 |
陰性 | N21 | N22 | N2.=N21+N22 |
總數(shù) | N.1=N11+N12 | N.2=N21+N22 | N=N1.+N2.或N.1+N.2 |
顯著性差異(х2) | c2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21), 自由度（df）=1 | ||
靈敏度(p+,，%) | p+=N11/N1. | ||
特異性(p-，%) | p-=N22/N2. | ||
假陰性率(pf-,，%) | pf-=N12/N1.=100-靈敏度 | ||
假陽性率(pf+,，%) | pf+=N21/N2.=100-特異性 | ||
相對準(zhǔn)確度，%d | (N11+N22)/(N1.+N2.) | ||
注： a由參比方法檢驗得到的結(jié)果或者樣品中實際的公議值結(jié)果,； b由待確認(rèn)方法檢驗得到的結(jié)果,。靈敏度的計算使用確認(rèn)后的結(jié)果。用于確認(rèn)方法時,，結(jié)果≥1mg/kg時,，判定為陽性（僅用于計算性能指標(biāo)）； c本方法規(guī)定：用于計算靈敏度和假陰性率的陽性樣品,，由參比方法檢驗得到的結(jié)果范圍應(yīng)在1—10mg/kg之間,。 N：任何特定單元的結(jié)果數(shù)，個下標(biāo)指行,，第二個下標(biāo)指列,。例如：N11表示行，列,，N1.表示所有的行,，N.2表示所有的第二列；N12表示行,，第二列,。 d為方法的檢測結(jié)果相對準(zhǔn)確性的結(jié)果，與一致性分析和濃度檢測趨勢情況綜合評價,。 | |||
文章（文字）來源：食品論壇網(wǎng)友分享
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