空氣、食品接觸面微生物檢驗(yàn)方法,、檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)
目的:
檢測生產(chǎn)車間空氣,、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機(jī)械設(shè)備的微生物指標(biāo),,生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境當(dāng)中病原微生物的監(jiān)控,,達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn),以控制食品成品的質(zhì)量,。
參照標(biāo)準(zhǔn):
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB15979-1995,、《HACCP原理與實(shí)施》、中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《公共場所空氣微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定》GB/T 18204.1-2000,、中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92,、 出入境檢驗(yàn)檢疫局二000四年《出入食品微生物檢驗(yàn)培訓(xùn)教材》中《出入食品生產(chǎn)廠衛(wèi)生細(xì)菌檢驗(yàn)方法》、日本東京冷凍食品檢驗(yàn)方法,。
采樣與檢測方法:
3.1空氣的采樣與測試方法
3.1.1樣品采集:
(1)取樣頻率:
a)車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時,,在加工前進(jìn)行采樣,以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。
b)全廠統(tǒng)一放長假后,,車間生產(chǎn)前,,進(jìn)行采樣。
c)產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時,,應(yīng)及時對車間進(jìn)行采樣,,如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn),整改后再進(jìn)行采樣檢驗(yàn),。
d)實(shí)驗(yàn)性新產(chǎn)品,,按客戶規(guī)定頻率采樣檢驗(yàn)。
e)正常生產(chǎn)狀態(tài)的采樣,,每周一次,。
(2)采樣方法
在動態(tài)下進(jìn)行,室內(nèi)面積不超過30 m2,,在對角線上設(shè)里,、中、外三點(diǎn),,里,、外點(diǎn)位置距墻1 m;室內(nèi)面積超過30 m2,,設(shè)東,、西、南,、北,、中五點(diǎn),周圍4點(diǎn)距墻1 m,。采樣時,,將含平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的平板(直徑9 cm)置采樣點(diǎn)(約桌面高度),并避開空調(diào),、門窗等空氣流通處,,打開平皿蓋,使平板在空氣中暴露5 min,。采樣后必須盡快對樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測,,送檢時間不得超過6h,若樣品保存于0~4℃條件時,,送檢時間不得超過24h,。
3.1.2菌落培養(yǎng):
(1)在采樣前將準(zhǔn)備好的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板置37℃±1℃ 培養(yǎng)24 h,取出檢查有無污染,,將污染培養(yǎng)基剔除,。
(2)將已采集樣品的培養(yǎng)基在6 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室,,細(xì)菌總數(shù)于37℃±1℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果,計數(shù)平板上細(xì)菌菌落數(shù),。
(3)菌落計算:
a) 記錄平均菌落數(shù),,用“個/皿"來報告結(jié)果,。用肉眼直接計數(shù),,標(biāo)記或在菌落計數(shù)器上點(diǎn)計,然后用5~10倍放大鏡檢查,,不可遺漏,。
b) 若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊,可分辨時仍以2 個或2個以上菌落計數(shù),。
3.2工作臺(機(jī)械器具)表面與工人手表面采樣與測試方法:
3.2.1樣品采集:
(1)取樣頻率:
a)車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時,,在加工前進(jìn)行擦拭檢驗(yàn),以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況,。
b)全廠統(tǒng)一放長假后,,車間生產(chǎn)前,進(jìn)行全面擦拭檢驗(yàn),。
c)產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時,,應(yīng)及時對車間可疑處進(jìn)行擦拭,如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn),,整改后再進(jìn)行擦拭檢驗(yàn),。
d)實(shí)驗(yàn)新產(chǎn)品,按客戶規(guī)定擦拭頻率擦拭檢驗(yàn),。
e)對工作表面消毒產(chǎn)生懷疑時,,進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。
f)正常生產(chǎn)狀態(tài)的擦拭,,每周一次,。
(2) 采樣方法:
a) 工作臺(機(jī)械器具):用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面(取與食品直接接觸或有一定影響的表面)取25cm2的面積,在其內(nèi)涂抹10次,,然后剪去手接觸部分棉棒,,將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。
b) 工人手:被檢人五指并攏,,用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面,,從指尖到指端來回涂擦10次,然后剪去手接觸部分棉棒,,將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢,。
(3)采樣注意事項(xiàng):
擦拭時棉簽要隨時轉(zhuǎn)動,,保證擦拭的準(zhǔn)確性,。對每個擦拭點(diǎn)應(yīng)詳細(xì)記錄所在分場的具體位置,、擦拭時間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時間
3.2.2細(xì)菌·大腸菌群的檢測培養(yǎng):
樣液稀釋:將放有棉棒的試管充分振搖,。此液為1:10稀釋液。如污染嚴(yán)重,可十倍遞增稀釋,,吸取1ml 1:10樣液加9ml無菌生理鹽水中,混勻,,此液為1:100稀釋液,。
3.2.2.1 細(xì)菌總數(shù):
(1)以無菌操作,,選擇1~2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內(nèi),,每個稀釋度做兩個平皿(平行樣),,將已融化冷至45℃左右的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿,每皿約15ml,充分混合。
(2)待瓊脂凝固后,,將平皿翻轉(zhuǎn),置36℃±1℃ 培養(yǎng)48 h后計數(shù),。
(3)結(jié)果報告:報告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)
3.2.2.2大腸菌群:
(1)平板法:
a) 以無菌操作,,選擇1~2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內(nèi),,每個稀釋度做兩個平皿(平行樣),將已融化冷至45℃左右的去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿,,每皿約15ml,,充分混合。待瓊脂凝固后,再覆蓋一層培養(yǎng)基,,約3-5 ml,。
b) 待瓊脂凝固后,將平皿翻轉(zhuǎn),,置36℃±1℃ 培養(yǎng)24h后計數(shù),。
c) 結(jié)果計算: 以平板上出現(xiàn)紫紅色菌落的個數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出。
d) 結(jié)果報告:報告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)
(2)試管法:
a) 以無菌操作,,選擇3個稀釋度各取1ml樣液分別接種到BGLB肉湯培養(yǎng)基中,,每個稀釋度接種三管。
b) 置BGLB肉湯管于36℃±1℃培養(yǎng)48±2h,。記錄所有BGLB肉湯管的產(chǎn)氣管數(shù),。
c) 結(jié)果報告:按BGLB肉湯管產(chǎn)氣管數(shù),查MPN表報告每25cm2食品接觸面中或每只手的大腸菌群值,。
3.2.3金黃色葡萄球菌檢測
(1)定性檢測
a) 取1ml稀釋液注入滅菌的平皿內(nèi),傾注15-20ml的B-P培養(yǎng)基,,(或是吸取0.1稀釋液,,用L棒涂布于表面干燥的B-P瓊脂平板),放進(jìn)36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2小時,。
b) 從每個平板上至少挑取1個可疑金黃色葡萄球菌的菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn),。
c) 結(jié)果報告:B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)為陽性,即報告手(工器具)上有金黃色葡萄球菌存在,。
(2)定量檢測
a) 以無菌操作,,選擇3個稀釋度各取1ml樣液分別接種到含10﹪氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中,每個稀釋度接種三管,。
b) 置肉湯管于36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48小時,。劃線接種于表面干燥的B-P瓊脂平板,置36℃±1℃ 培養(yǎng)45~48小時,。
c) 從B-P瓊脂平板上,,挑取典型或可疑金黃色葡萄球菌菌落接種肉湯培養(yǎng)基,36℃±1℃培養(yǎng)20~24小時,。
d) 取肉湯培養(yǎng)物做血漿凝固酶試驗(yàn),,記錄試驗(yàn)結(jié)果。
e) 報告結(jié)果:根據(jù)凝固酶試驗(yàn)結(jié)果,,查MPN表報告每25 cm2食品接觸面中或每只手的金黃色葡萄球菌值,。
3.3工廠環(huán)境中病原體的檢測計劃與方法
檢測計劃:為了保證食品安全,,工廠應(yīng)該對生產(chǎn)環(huán)境中的病原微生物進(jìn)行檢測和評估,檢測項(xiàng)目包括李斯特菌,,沙門氏菌等病原體微生物,,化驗(yàn)室應(yīng)該按照一定的計劃對生產(chǎn)場所環(huán)境中的病原體進(jìn)行檢測,其中包括地面,、下水道,、排水溝、墻壁,、天花板,、設(shè)備框架、運(yùn)輸?shù)闹Ъ?,冷藏裝置,、速凍機(jī)、傳送帶,、設(shè)備的螺絲,、維修工具等部位。當(dāng)某個點(diǎn)檢測到病員微生物時,,應(yīng)該對環(huán)境中的相似點(diǎn)加大檢測頻率,;在把所有的預(yù)定點(diǎn)檢測完后,應(yīng)該對環(huán)境中的病原微生物的存在狀況進(jìn)行全面評估,,在下一次環(huán)境檢測循環(huán)過程中加強(qiáng)檢測容易出現(xiàn)病原體的環(huán)境點(diǎn),,達(dá)到持續(xù)改進(jìn)的目的。
檢測頻率: 每月兩次,每次每個區(qū)域至少選取5個檢測點(diǎn),分別進(jìn)行檢測,。
3.3.1環(huán)境李斯特菌的檢測方法(3MTM PetrifilmTM 環(huán)境李斯特菌的測試片)
3.3.1.1 用涂抹棒,,海綿或者其他采樣設(shè)備收集環(huán)境樣本。
3.3.1.2 將收集的樣本添加10毫升滅菌的緩沖蛋白胨水,,將樣本與緩沖蛋白胨混合1分鐘,,將樣品置于室溫(20-30℃)1小時,最久不超過1.5小時,,以修復(fù)損傷的李斯特菌,。
3.3.1.3 將測試片放在平坦處,掀起上層膜,。
3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升樣品到下層膜中央,,將上層膜緩慢蓋下,以免產(chǎn)生氣泡,。
3.3.1.5 輕輕將塑料壓板放在位于接種區(qū)上層膜上,,不要壓,扭轉(zhuǎn)或者滑動壓板。提起壓板等至少十分鐘,,以使膠體凝固,。
3.3.1.6 將測試片透明面朝上,可疊放至十片,,在37℃±1℃培養(yǎng)26-30小時,,可以用標(biāo)準(zhǔn)菌落記數(shù)器或者其他光學(xué)放大器判讀,不要記數(shù)圓形輪廓上的菌落,,因?yàn)樗麄儾皇苓x擇性培養(yǎng)基的影響,。
3.3.1.7 對于定性檢測,根據(jù)紫紅色菌落是否存在,,結(jié)果記為檢出或者未檢出,。
3.3.2環(huán)境中沙門氏菌的檢測方法
3.3.2.1采樣地點(diǎn): 選取采樣點(diǎn)時因盡量選取微生物容易滋生的地方
| FD車間 | ||||
東區(qū)初加工 | 傳遞窗口表面、排水溝,、 | 卸料間 | 墻壁,、墻角,、地面、天花板,、 | ||
東區(qū)精加工 | 地面,、墻壁、墻角,、排水溝,、 | 暫存間 | 墻壁、地面,、天花板,、墻角、墻縫 | ||
西區(qū)初加工 | 傳遞窗口表面,、地面,、墻壁、 | 挑選間 | 墻壁,、地面、天花板,、墻角,、墊板 | ||
西區(qū)精加工 | 地面、墻壁、墻角,、排水溝,、排水溝出口、速動機(jī)鏈條,、天花板 | 包裝室 | 墻壁,、地面、天花板,、金探傳送帶表面,、落地料存放處 |
3.3.2.2 操作步驟
3.3.2.2.1采樣應(yīng)在生產(chǎn)開始后進(jìn)行,用已浸潤過的棉拭在選定的被測表面旋轉(zhuǎn)涂抹約100cm2的面積,,然后將棉拭放回涂抹試管并蓋緊,。
3.3.2.2.2將樣品帶回實(shí)驗(yàn)室,每5個點(diǎn)混合成一個樣品, 登記編號,按照SN0170-92標(biāo)準(zhǔn)及時檢測,,若有陽性結(jié)果出現(xiàn),,應(yīng)逐步對所混合的每個點(diǎn)分別檢測。
物體表面涂抹菌落總數(shù)計算方式:物體表面細(xì)菌總數(shù)(cfu/c㎡)=平皿上菌落的平均數(shù)*采樣液稀釋倍數(shù)/采樣面積(cm2)
根椐GB15979-2002《一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》的標(biāo)準(zhǔn),生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生指標(biāo)
1 裝配與包裝車間空氣中細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤2 500 cfu/m3,。
2 工作臺表面細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20 cfu/cm2,。
3. 工人手表面細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤300 cfu/只手,并不得檢出致病菌,。
人員和環(huán)境衛(wèi)生檢測方法
一,、 空氣采樣及檢驗(yàn)方法
1培養(yǎng)基:普通營養(yǎng)瓊脂平板,按GB4789.28中3.7條配制
2采樣(空氣沉降法)
2.1布點(diǎn):面積小于30平方米的車間,,設(shè)一對角線,,在線上取3點(diǎn),即中心一點(diǎn),,兩端在距墻1米處各取一點(diǎn),;面積大于30平方米的車間,設(shè)東,、西,、南、北,、中5個點(diǎn),,其中東、西,、南,、北點(diǎn)均距墻1米。
2.2采樣高度:與地面垂直高度80-150厘米,。
2.3采樣方法,;用直徑為9厘米的普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)上暴露20分鐘蓋上送檢培養(yǎng)。
3培養(yǎng):于37℃培養(yǎng)24小時。
4檢測頻率:每周
空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):
生車間,、熟車間,、成品車間:低于100個
半成品庫、成品庫:低于10個
二,、設(shè)備的采樣與檢驗(yàn)方法
根據(jù)生產(chǎn)過程所要求的重點(diǎn)衛(wèi)生部位,,實(shí)驗(yàn)室對其進(jìn)行涂抹采樣,進(jìn)行細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn),。
1采樣方法
1.1涂抹法(適用于表面平坦的設(shè)備和工器具產(chǎn)品接觸面)
取經(jīng)過滅菌的鋁片框(框內(nèi)面積為50平方厘米)放在需檢查的部位上,,用無菌棉球蘸上無菌生理鹽水擦拭鋁片中間方框部分,擦完后立即將棉球投入盛有10毫升無菌生理鹽水的試管中,,此液每毫升代表5平方厘米,。
1.2貼紙法(適用于表面不平坦的設(shè)備和工器具接處面)
將無菌規(guī)格紙(5×5厘米,紙質(zhì)要薄而軟)用無菌生理鹽水泡濕后,,于需測部分分別貼上兩張,,兩張紙面積共50平方厘米,然后取下放入盛有10毫升無菌生理鹽水的試管中,,此液每毫升代表5平方厘米,。
2檢驗(yàn)方法
2.1細(xì)菌總數(shù)的檢驗(yàn)
將上述樣液充分振搖,根據(jù)衛(wèi)生情況,,相應(yīng)地做10倍遞增稀釋,,選擇其中2-3個合適的稀釋度作平皿傾注培養(yǎng),培養(yǎng)基用普通營養(yǎng)瓊脂,,每個稀釋度作2個平皿,,每個平皿注入1毫升樣液,于37℃培養(yǎng)24小時后計菌落數(shù),。
結(jié)果計算
表面細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)=平皿上菌落的平均數(shù)×樣液稀釋倍數(shù)/30×2
2.2致病菌的檢驗(yàn)
沙門氏菌,,參照GB4789.4進(jìn)行
金黃色葡球菌,參照GB7918.5進(jìn)行
4.檢驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn):細(xì)菌總數(shù)10-100個∕cm2,,
5.關(guān)鍵點(diǎn):細(xì)菌總數(shù)≤10個∕cm2
一般區(qū)域:細(xì)菌總數(shù)≤100個∕cm2
三,、人員手表面細(xì)菌污染情況的檢驗(yàn)
1. 采樣方法:用一支蘸有無菌生理鹽水的棉拭子涂擦被檢對象手的全部,反復(fù)兩次,,涂擦的時候棉拭子要相應(yīng)地轉(zhuǎn)動,擦完后,,將手接觸部分剪去,,將棉拭子放入裝有10毫升無菌生理鹽水的試管內(nèi)送檢培養(yǎng)。
2. 檢驗(yàn)方法:同工器具表面細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法,。
3. 結(jié)果計算:每只手表面的細(xì)菌總數(shù)(cfu/只手)=平皿上菌落的平均數(shù)× 樣液稀釋倍數(shù)
四,、消毒液藥效的微生物學(xué)鑒定法
1采樣對象:正常使用的消毒液,和已知配制好備用的消毒液
2采樣及檢驗(yàn)方法
在無菌條件下,用無菌吸管吸取1毫升樣液,,加入9毫升稀釋液中混勻,,對于醇類與酚類消毒劑,稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可,;對于含氯消毒劑,、含碘消毒劑,需在肉湯中加入0.1%硫代硫酸鈉,,對洗必泰,、季銨鹽類消毒劑,需在肉湯中加入3%(W/V)土溫80和0.3%卵磷脂,;對醛類消毒劑,,需在肉湯中加入0.3%甘氨酸;對于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑,,需在肉湯中加入(W/V)土溫80,,以中和被檢樣液中的殘效作用,
將注入了樣液的稀釋液充分搖勻,,取1毫升注入平皿,,隨之倒入普通營養(yǎng)瓊脂,待瓊脂凝固后,,翻轉(zhuǎn)平皿,,將平皿于37℃條件下培養(yǎng)24小時后計平板上生長的菌落數(shù)。
3結(jié)果分析
平板上有菌生長,,表明被檢樣液中有殘存活菌,,若每個平板菌落數(shù)在10個以下,仍可用于消毒,,若每個平板菌落數(shù)超過10個,,說明每毫升被檢樣液含菌量已超過100個,即不宜在用于消毒,。
該公式是一個經(jīng)驗(yàn)公式.它的理論模式依據(jù)是:100CM2的面積上10MIN降落的菌落數(shù),
等于1升空氣中所含的細(xì)菌總數(shù).系數(shù)50000基于上述假說和單位換算而來.
細(xì)菌總數(shù)(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT
5/10T:實(shí)際放置了5MIN;
100/A:A單一培養(yǎng)皿面積;
1000:1M3=1000L啊,換算成m3
1,、空氣細(xì)菌落菌數(shù)單位既然是cfu/m3,那采樣時應(yīng)該還要記錄放置平皿的高度,。
2,、食品安全管理體系中罐頭行業(yè)有個標(biāo)準(zhǔn)如下:
落下菌數(shù) 空氣污染程度 評價
30以下 清潔 安全
30~50 中等清潔
50~70 低等清潔 應(yīng)加注意
70~100 高度污染 對空氣要進(jìn)行消毒
100以上 嚴(yán)重污染 禁止加工
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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