高壓均質(zhì)機是由一個高壓柱塞泵及特殊結(jié)構(gòu)的均質(zhì)閥組成,,需處理的物料在柱塞所造成的高壓條件下進入可調(diào)節(jié)壓力大小的閥組中,,失壓后的物料從可調(diào)節(jié)限流縫隙中以*的流速(1000米/秒,可達1500米/秒)噴出,,撞在閥組件之一的沖擊環(huán)上 保持細胞活性的重要參數(shù)是溫度和時間,,物料在高壓均質(zhì)閥內(nèi)部的約0.01秒的瞬間,在高壓的作用下溫度會上升到大約10~15℃,。 通過均質(zhì)閥后在經(jīng)過高效換熱器的作用下,,溫度在2~3秒作用會迅速下降,所以物料在溫度相對較高的條件下僅僅維持多3秒鐘,。 滲透壓沖擊破碎法(osmotic shock) 滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法,,將細胞放在高滲透壓的溶液中(如一定濃度的甘油或蔗糖溶液),由于滲透壓的作用,,細胞內(nèi)水分便向外滲出,,細胞發(fā)生收縮,當(dāng)達到平衡后,,將介質(zhì)快速稀釋,,或?qū)⒓毎D(zhuǎn)入水或緩沖液中,由于滲透壓的突然變化,胞外的水迅速滲入胞內(nèi),,引起細胞快速膨脹而破裂,。 凍融破碎法(freezing and thawing) 將細胞放在低溫下冷凍(約-15℃),然后在室溫中融化,,反覆多次而達到破壁作用,。由于冷凍,一方面能使細胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂,,從而增加細胞的親水性能,,另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶,形成冰晶粒,,引起細胞膨脹而破裂,。對于細胞壁較脆弱的菌體,可采用此法,。 酶溶破碎法(enzyme lysis) 酶解是利用溶解細胞壁的酶處理菌體細胞,,使細胞壁受到部分或*破壞后,再利用滲透壓沖擊等方法破壞細胞膜,,進一步增大胞內(nèi)產(chǎn)物的通透性,。溶菌酶(lysozyme)適用于革蘭氏陽性菌細胞的分解,應(yīng)用于革蘭氏陰性菌時,,需輔以EDTA使之更有效地作用于細胞壁,。 真核細胞的細胞壁不同于原核細胞,需采用不同的酶,。 化學(xué)破碎法(chemical treatment) 采用化學(xué)法處理可以溶解細胞或抽提胞內(nèi)組分,。常用酸、堿,、表面活性劑和有機溶劑等化學(xué)試劑 去垢劑破碎法(detergents)
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