細(xì)胞破碎技術(shù)
破碎方法可規(guī)納為機(jī)械法和非機(jī)械法兩大類(lèi),。
機(jī)械法
高壓勻漿破碎法（homogenization）
高壓勻漿器是常用的設(shè)備，它由可產(chǎn)生高壓的正向排代泵（positive displacenemt pump）和排出閥（discharge valve）組成,，排出閥具有狹窄的小孔,，其大小可以調(diào)節(jié)。細(xì)胞漿液通過(guò)止逆閥進(jìn)入泵體內(nèi),，在高壓下迫使其在排出閥的小孔中高速?zèng)_出,，并射向撞擊環(huán)上，由于突然減壓和高速?zèng)_擊,，使細(xì)胞受到高的液相剪切力而破碎,。在操作方式上，可以采用單次通過(guò)勻漿器或多次循環(huán)通過(guò)等方式,，也可連續(xù)操作,。為了控制溫度的升高，可在進(jìn)口處用干冰調(diào)節(jié)溫度,，使出口溫度調(diào)節(jié)在20℃左右,。在工業(yè)規(guī)模的細(xì)胞破碎中，對(duì)于酵母等難破碎的及濃度高或處于生長(zhǎng)靜止期的細(xì)胞,。
振蕩珠擊破碎法 (Skaking Bead)
將等體積的小量組織樣品與高密度的ZircoBeads放入可密封的2ml螺旋蓋微量管中,，再加入緩沖液與穩(wěn)定成份到1.5ml的體積，用6500RPM振湯機(jī)高速上下振動(dòng)8秒,，休息8秒,，再振動(dòng)8秒即可。此方法是目前快且一次可處理多樣品的方法,。 一臺(tái)機(jī)器多可以在一天處理2400支樣品,。對(duì)小量且多樣的人很方便,。
高速攪拌珠研磨破碎法（fine grinding）
研磨是常用的一種方法，它將細(xì)胞懸浮液與玻璃小珠,、石英砂或氧化鋁等研磨劑一起快速攪拌,，使細(xì)胞獲得破碎。在工業(yè)規(guī)模的破碎中,，常采用高速珠磨機(jī) ,。
超聲波破碎法（ultrasonication）
超聲波破碎法利用超聲波振蕩器發(fā)射的15-25kHz的超聲波探頭處理細(xì)胞懸浮液。 超聲波振蕩器有不同的類(lèi)型,，常用的為電聲型,，它是由發(fā)生器和換能器組成,，發(fā)生器能產(chǎn)生高頻電流,，換能器的作用是把電磁振蕩轉(zhuǎn)換成機(jī)械振動(dòng)。超聲波振蕩器以可分為槽式和探頭直接插入介質(zhì)兩種型式,。
撞擊破碎法
非機(jī)械法
滲透壓沖擊破碎法（osmotic shock）
滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法,，將細(xì)胞放在高滲透壓的溶液中（如一定濃度的甘油或蔗糖溶液），由于滲透壓的作用,，細(xì)胞內(nèi)水分便向外滲出,，細(xì)胞發(fā)生收縮，當(dāng)達(dá)到平衡后,，將介質(zhì)快速稀釋?zhuān)驅(qū)⒓?xì)胞轉(zhuǎn)入水或緩沖液中,，由于滲透壓的突然變化，胞外的水迅速滲入胞內(nèi),，引起細(xì)胞快速膨脹而破裂,。
凍融破碎法（freezing and thawing）
將細(xì)胞放在低溫下冷凍（約-15℃），然后在室溫中融化,，反覆多次而達(dá)到破壁作用,。由于冷凍，一方面能使細(xì)胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂,，從而增加細(xì)胞的親水性能,，另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶，形成冰晶粒,，引起細(xì)胞膨脹而破裂,。對(duì)于細(xì)胞壁較脆弱的菌體，可采用此法,。
酶溶破碎法（enzyme lysis）
酶解是利用溶解細(xì)胞壁的酶處理菌體細(xì)胞,，使細(xì)胞壁受到部分或*破壞后，再利用滲透壓沖擊等方法破壞細(xì)胞膜,，進(jìn)一步增大胞內(nèi)產(chǎn)物的通透性,。溶菌酶（lysozyme)適用于革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞的分解,，應(yīng)用于革蘭氏陰性菌時(shí)，需輔以EDTA使之更有效地作用于細(xì)胞壁,。 真核細(xì)胞的細(xì)胞壁不同于原核細(xì)胞,，需采用不同的酶。
化學(xué)破碎法（chemical treatment）
采用化學(xué)法處理可以溶解細(xì)胞或抽提胞內(nèi)組分,。常用酸,、堿、表面活性劑和有機(jī)溶劑等化學(xué)試劑
去垢劑破碎法（detergents）
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