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產(chǎn)品簡介

產(chǎn)品簡介： 本核蛋白提取試劑盒提供了一種簡單,、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個過程只需約60分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細(xì)胞中分離出來,。得到的蛋白可以用于Western blot等實驗,。本試劑盒通過漿蛋白抽提試劑使細(xì)胞膨脹破裂，釋放出胞漿蛋白,，再通過離心得到細(xì)胞核,。然后通過核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。本試劑盒可以抽提50/100個樣品（每個樣品約2×10⁶個Hela細(xì)胞或40mg組織）,。

規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品內(nèi)容：

保存：核/漿蛋白抽提試劑4℃保存,，PMSF于-20 ℃保存。

操作方法：

裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行,。

一,、對于體外培養(yǎng)細(xì)胞：

1．根據(jù)用量取適當(dāng)?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM,。PMSF需現(xiàn)用現(xiàn)加,，可以在兩種蛋白抽提液中加入DTT至終濃度0.5mM。

2．對于貼壁細(xì)胞,，去除培養(yǎng)液,，用PBS洗一遍，用細(xì)胞刮刀收集細(xì)胞,，或用EDTA消化后吹打下細(xì)胞,。500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清留下沉淀備用,。

3．對于懸浮細(xì)胞：用PBS洗一遍,，500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清,，留下細(xì)胞沉淀備用,。

4．每20μl細(xì)胞沉淀加入200μl漿蛋白抽提試劑（2×10⁶個細(xì)胞沉淀的體積約20μl或40mg）。

5．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當(dāng)延長），必須使細(xì)胞沉淀分散開成單細(xì)胞懸液,。細(xì)胞沉淀分散不會導(dǎo)致蛋白產(chǎn)量降低,。

6．冰浴10分鐘。

7．最高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒,，4℃ 12000～16000g離心10分鐘,。

8．上清即為抽提得到的細(xì)胞漿蛋白，立即吸取上清至預(yù)冷的樣品管中備用,，進(jìn)行后續(xù)的PAGE,、Western等實驗，但蛋白濃度較低,，可根據(jù)需要進(jìn)行相應(yīng)濃縮,。

9．沉淀即為細(xì)胞核，要吸盡殘余的上清（避免細(xì)胞漿蛋白的污染）,，加入50-100μl核蛋白抽提試劑,。

10．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當(dāng)延長）至沉淀分開，冰浴10分鐘,。

11．最高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒,，4℃12000～16000g離心10分鐘。12．立即吸取上清至預(yù)冷的樣品管中,，此即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白,。可進(jìn)行后續(xù)實驗或-70℃凍存,。    對于組織樣品：    把組織稱重后,，盡可能切成非常細(xì)小的碎片，按每50mg組織加入200μl-500μl PBS,，用勻漿器冰上勻漿制成細(xì)胞懸液,，500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清,，收集沉淀,。加入200μl漿蛋白抽提試劑后接上述步驟5。

注意事項：

1．裂解得到的蛋白樣品,，由于含有較高濃度的去垢劑干擾,，不能用Bradford法測定蛋白濃度，可以選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白定量試劑盒(貨號PC0020)測定蛋白濃度,。

2．對于組織樣品,，本試劑盒適用于新鮮組織，對凍存組織抽提效果較差,。

3．為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

備注：以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻(xiàn), Solarbio暫未進(jìn)行獨立驗證, 僅供參考。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

公司簡介

上海索萊寶生物科技有限公司是一家集銷售生化試劑,、實驗耗材、自產(chǎn)分子生物學(xué)產(chǎn)品為一體,，并能提供的專業(yè)性生物科技公司,。公司秉承“以客戶為中心，以產(chǎn)品為保障,、以誠信為基礎(chǔ),、以創(chuàng)新為宗旨"的發(fā)展理念，在依靠客戶的大力支持和員工的不懈努力下獲得了快速的成長,。公司織結(jié)構(gòu)清晰,，內(nèi)部管理科學(xué)，擁有一支既分工細(xì)致又高度合作的年輕化隊伍,，保持了各個部門之間的高效合作運轉(zhuǎn),，充分保障了公司在充滿競爭的市場中處于地位。公司注重與*合作,，目前已與 Amersham,、Amresco、Axygen,、BD,、Corning、Dragon,、Eppendorf等企業(yè)結(jié)成緊密的合作伙伴關(guān)系,，代理其世界的*產(chǎn)品，并在全國各地設(shè)有分銷機(jī)構(gòu),。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和實驗技術(shù)解決方案,。豐富的經(jīng)驗、優(yōu)良的品質(zhì),、充足的庫存,、準(zhǔn)確的交貨時間、競爭力的價格,，所有這些都保證了我們向您提供的是專業(yè)的服務(wù),！立足北京，上海,，*,，隨著產(chǎn)品營銷戰(zhàn)略的不斷延伸，我們將逐步發(fā)展成為*的專業(yè)性生物科技公司,。我們希望能夠和尊敬的客戶一起,，利用各自的資源優(yōu)勢和勇于進(jìn)取的敬業(yè)精神,，為中國生命科學(xué)研究的發(fā)展作出更多的貢獻(xiàn)。為了更好,、更全面的發(fā)展,，現(xiàn)公司正在誠招各地代商和招聘若干銷售、研發(fā)人員,，歡迎垂詢并期待您的加入,！

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