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產(chǎn)品簡介

產(chǎn)品簡介： 本核蛋白提取試劑盒提供了一種簡單,、方便的從培養(yǎng)細胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個過程只需約60分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細胞中分離出來,。得到的蛋白可以用于Western blot等實驗,。本試劑盒通過漿蛋白抽提試劑使細胞膨脹破裂，釋放出胞漿蛋白,，再通過離心得到細胞核,。然后通過核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白,。本試劑盒可以抽提50/100個樣品（每個樣品約2×10⁶個Hela細胞或40mg組織）。

規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品內(nèi)容：

保存：核/漿蛋白抽提試劑4℃保存,，PMSF于-20 ℃保存,。

操作方法：

裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

一,、對于體外培養(yǎng)細胞：

1．根據(jù)用量取適當?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入PMSF,，使PMSF的最終濃度為1mM。PMSF需現(xiàn)用現(xiàn)加,，可以在兩種蛋白抽提液中加入DTT至終濃度0.5mM,。

2．對于貼壁細胞，去除培養(yǎng)液,，用PBS洗一遍,，用細胞刮刀收集細胞，或用EDTA消化后吹打下細胞,。500 g離心2～3分鐘收集細胞,，吸盡上清留下沉淀備用。

3．對于懸浮細胞：用PBS洗一遍,，500 g離心2～3分鐘收集細胞,，吸盡上清，留下細胞沉淀備用,。

4．每20μl細胞沉淀加入200μl漿蛋白抽提試劑（2×10⁶個細胞沉淀的體積約20μl或40mg）,。

5．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當延長），必須使細胞沉淀分散開成單細胞懸液,。細胞沉淀分散不會導致蛋白產(chǎn)量降低,。

6．冰浴10分鐘。

7．最高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒,，4℃ 12000～16000g離心10分鐘,。

8．上清即為抽提得到的細胞漿蛋白，立即吸取上清至預冷的樣品管中備用,，進行后續(xù)的PAGE,、Western等實驗，但蛋白濃度較低,，可根據(jù)需要進行相應濃縮,。

9．沉淀即為細胞核，要吸盡殘余的上清（避免細胞漿蛋白的污染）,，加入50-100μl核蛋白抽提試劑,。

10．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當延長）至沉淀分開，冰浴10分鐘。

11．最高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒,，4℃12000～16000g離心10分鐘,。12．立即吸取上清至預冷的樣品管中，此即為抽提得到的細胞核蛋白,?？蛇M行后續(xù)實驗或-70℃凍存。    對于組織樣品：    把組織稱重后,，盡可能切成非常細小的碎片,，按每50mg組織加入200μl-500μl PBS，用勻漿器冰上勻漿制成細胞懸液,，500 g離心2～3分鐘收集細胞，吸盡上清,，收集沉淀,。加入200μl漿蛋白抽提試劑后接上述步驟5。

注意事項：

1．裂解得到的蛋白樣品,，由于含有較高濃度的去垢劑干擾,，不能用Bradford法測定蛋白濃度，可以選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白定量試劑盒(貨號PC0020)測定蛋白濃度,。

2．對于組織樣品,，本試劑盒適用于新鮮組織，對凍存組織抽提效果較差,。

3．為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

備注：以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻, Solarbio暫未進行獨立驗證, 僅供參考,。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

公司簡介

上海索萊寶生物科技有限公司是一家集銷售生化試劑,、實驗耗材、自產(chǎn)分子生物學產(chǎn)品為一體,，并能提供的專業(yè)性生物科技公司,。公司秉承“以客戶為中心，以產(chǎn)品為保障,、以誠信為基礎,、以創(chuàng)新為宗旨"的發(fā)展理念，在依靠客戶的大力支持和員工的不懈努力下獲得了快速的成長,。公司織結構清晰,，內(nèi)部管理科學，擁有一支既分工細致又高度合作的年輕化隊伍,，保持了各個部門之間的高效合作運轉(zhuǎn),，充分保障了公司在充滿競爭的市場中處于地位。公司注重與*合作，目前已與 Amersham,、Amresco,、Axygen、BD,、Corning,、Dragon、Eppendorf等企業(yè)結成緊密的合作伙伴關系,，代理其世界的*產(chǎn)品,，并在全國各地設有分銷機構。我們將以高度的責任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和實驗技術解決方案,。豐富的經(jīng)驗,、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫存,、準確的交貨時間,、競爭力的價格，所有這些都保證了我們向您提供的是專業(yè)的服務,！立足北京,，上海，*,，隨著產(chǎn)品營銷戰(zhàn)略的不斷延伸,，我們將逐步發(fā)展成為*的專業(yè)性生物科技公司。我們希望能夠和尊敬的客戶一起,，利用各自的資源優(yōu)勢和勇于進取的敬業(yè)精神,，為中國生命科學研究的發(fā)展作出更多的貢獻。為了更好,、更全面的發(fā)展,，現(xiàn)公司正在誠招各地代商和招聘若干銷售、研發(fā)人員,，歡迎垂詢并期待您的加入,！

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