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產(chǎn)品簡介

bradford蛋白定量試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容：

產(chǎn)品簡介：

考馬斯亮蘭G-250染料,，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合,，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm變?yōu)?95nm,，在一定的濃度范圍內(nèi),，測定的吸光度值A(chǔ)595與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響,，樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M,，二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM，但受略高濃度的去垢劑影響,，需確保SDS的濃度低于0.1%,，Triton X-100低于0.1%,，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用索萊寶生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒,。

操作說明：

一．微孔酶標(biāo)儀法 1.  溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,，取10ul，稀釋至250ul ,，使終濃度為0.2mg/ml,。待測蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋,。但是為了簡便起見,，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。 2.  5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻,，取1ml 5×G250染色液,，加入4ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液,，此1×G250染色液可在4℃保存一周,。 3.  將標(biāo)準(zhǔn)品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中，加PBS稀釋液補(bǔ)足到20微升,。 4. 將樣品作適當(dāng)稀釋（最好多做幾個梯度,，如作2倍、4倍,、8倍稀釋）,，加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差,，標(biāo)準(zhǔn)線前面的點可能不很準(zhǔn)確,，所以盡可能的讓樣品點落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后。 5. 各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液,，室溫放置3-5分鐘,。 6.  用酶標(biāo)儀測定A595，或560-610nm之間的其它波長的吸光度,。 7.  根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中的蛋白濃度,。 二．分光光度計法 如無酶標(biāo)儀，染色反應(yīng)可在離心管中進(jìn)行,，反應(yīng)液混勻后加入比色皿中,，使用分光光度計測定吸光值。步驟如下：    1.  取八支（或者更多）干凈的10ml離心管,，標(biāo)記上號,。 2.  取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀釋至終濃度為0.2mg/ml。 3. 5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻，取10ml 5×G250染色液,，加入40ml雙蒸水,，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周,。

4.  按下表加入試劑(以每孔5ml計,，多余的用來清洗比色皿)

5. 反應(yīng)3分鐘后測OD值。為了實驗的準(zhǔn)確性,，可每間隔2分鐘加一管染色液,，每間隔2分鐘測一管OD值。如下表：

此圖為伯樂酶標(biāo)儀680,，單波長,，570nm測得。室溫反應(yīng)三分鐘

備注：以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻(xiàn), Solarbio暫未進(jìn)行獨立驗證, 僅供參考,。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.