目錄:上海索寶生物科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒（常量）>>其他系列>> BC3710全蛋白提取試劑盒（強(qiáng)）
| 參考價(jià) | ￥ 600 |
| 訂貨量 | ≥1盒 |
| ￥600 |
| ≥1盒 |
更新時(shí)間：2023-08-31 13:40:36瀏覽次數(shù)：2061評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T 100T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | BC3710 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,農(nóng)林牧漁,能源,綜合 |
| 儲(chǔ)存條件 | -20℃,，避光,，有效期至少1年 |
| 規(guī)格 | 50T 100T |
| 單位 | 盒 |
全蛋白提取試劑盒（強(qiáng)）用于哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取總蛋白,，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,，作用較為強(qiáng)烈,，可快速獲得總蛋白,，可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn),，由于含有上述的酶抑制劑,，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究,。本品僅用于科研。
產(chǎn)品組成:
規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 | |
裂解液（強(qiáng)） | 100 ml | 2-8 oC |
磷酸酶抑制劑（100x） | 1ml | -20 oC |
蛋白酶抑制劑（100x） | 1 ml | |
PMSF（100x） | 1ml |
操作方法:
1,、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑,、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻,，放置在冰上備用,；
稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處,，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎,，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液,，研磨直至沒(méi)有明顯的組織塊，這個(gè)過(guò)程注意冰上操作,；
將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中,，4 oC 12000g離心30min；
吸取上清至新的管中,；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn),。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取,，避免反復(fù)凍融,，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)
2,、細(xì)胞總蛋白的提取
裂解液的用量：107個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml,；
貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次,，棄去PBS,，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞,，
將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min
懸浮細(xì)胞：4 oC 400g離心收集細(xì)胞,，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞,，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，
渦旋10s,，放置冰上裂解10min,，重復(fù)3-4次；
裂解完畢之后,，將細(xì)胞裂解液4 oC 12000g離心30min,；
將上清移入新的EP管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn),。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC,，即用即取，避免反復(fù)凍融,，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存,。)
注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)過(guò)程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融,，保證操作過(guò)程中的低溫環(huán)境,；
PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)镻MSF在水溶液中會(huì)快速降解,；
備注：以上數(shù)據(jù)均來(lái)自公開文獻(xiàn), Solarbio暫未進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證, 僅供參考,。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.
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