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蛋白電泳(PAGE)

閱讀:3272      發(fā)布時間:2010-2-27
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蛋白電泳(PAGE)

聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N,,N,,N,,N—四甲基乙二胺(簡稱TEMED)和催化劑過硫
酸銨(簡稱AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯(lián)成三維網狀結構的凝膠,以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis,,簡稱PAGE)
S DS-PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液,,SDS可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞
蛋白質分子的二級和三級結構,,β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,,破壞蛋白質的四級結構。SDS還與蛋白質結合使蛋白
質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,,這時各種蛋白質分子本身的電荷*被SDS掩蓋,。這樣電泳時,就消除了各種蛋白質本身電荷及結
構上的差異,,電泳速度只是與蛋白質分子量有關,。用本法測定蛋白質的分子量只需根據(jù)待測蛋白質在已知分子量的標準蛋白質圖中的位
置,就能得知分子量.

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