日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶（NADP-MDH）試劑盒

商品貨號(hào)：QS1003
英文名稱(chēng)：NADP-Malate Dehydrogenase（NAD-MDH）Assay Kit
別名：NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶試劑盒 NADP-MDH Kit NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶（NADP-MDH）試劑盒 NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶（NADP-MDH）測(cè)試盒
檢測(cè)方法：常量法

測(cè)定意義：

MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動(dòng)物,、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,，催化蘋(píng)果酸形成草酰乙酸；相反,，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋(píng)果酸,。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑,。因此,，MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,，包括線粒體的能量代謝,、 蘋(píng)果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng),、活性氧代謝和抗病性等,。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴(lài)的MDH和NADP-依賴(lài)的MDH,， NADP-MDH主要存在于真核細(xì)胞中,。

測(cè)定原理：

NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋(píng)果酸,，導(dǎo)致340nm處光吸收下降。

貨號(hào): QS1003                                                      規(guī)格：50管/48樣

NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶（NADP-MDH）試劑盒說(shuō)明書(shū)

紫外分光光度法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動(dòng)物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,，催化蘋(píng)果酸形成草酰乙酸,；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋(píng)果酸,。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物,， 連接多條重要的代謝途徑。因此,，MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,，包括線粒體的能量代謝、 蘋(píng)果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng),、活性氧代謝和抗病性等,。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴(lài)的MDH和NADP-依賴(lài)的MDH,， NADP-MDH主要存在于真核細(xì)胞中,。

測(cè)定原理：

NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋(píng)果酸，導(dǎo)致340nm處光吸收下降,。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

紫外分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、1 mL石英比色皿和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一: 提取液60 mL×1瓶,，在4℃保存,；

試劑二: 液體50 mL×1瓶，在4℃保存,；

試劑三: 粉劑×2支,，-20℃保存；臨用前加入300μL蒸餾水,；用不完的試劑分裝后-20℃

        保存,，禁止反復(fù)凍融。

試劑四: 粉劑×2支,，-20℃保存,；臨用前加入300μL蒸餾水；用不完的試劑分裝后-20℃

        保存，禁止反復(fù)凍融,。

樣本測(cè)定的準(zhǔn)備：

1、細(xì)菌,、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一）,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率20％或200W，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min,，取上清置冰上待測(cè),。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）,，進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測(cè),。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè),。

測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零,。
2. 將試劑二在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上,。
3. 操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,，計(jì)算ΔA=A1-A2,。

注意：若A1-A2大于0.5，需將樣本用提取液稀釋?zhuān)笰1-A2小于0.5,，可提高檢測(cè)靈敏度,。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

NADP-MDH活力單位的計(jì)算：

1,、血清（漿）NADP-MDH活力的計(jì)算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷V樣÷T=6430×ΔA

2、組織,、細(xì)菌或細(xì)胞中NADP-MDH活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/10⁴ cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷（V樣÷V樣總×500）÷T=12.86×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積,，8×10^-4 L,；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V樣：加入樣本體積,，0.02 mL,；V樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應(yīng)時(shí)間,，1 min；W：樣本質(zhì)量,，g,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),，500萬(wàn)。