| 常見問題 | 可能原因 | 建議解決方案 |
| 未回收或回收率低 | 膠塊未全部溶解 | 溶解凝膠時應(yīng)該置于65℃水浴,，不斷上下顛倒,，確定膠塊*溶解后再進(jìn)行下一步操作。如果凝膠濃度較大，可增加溶膠液使用量,。 |
| 膠塊太大（>400mg） | 如果需要處理的膠塊太大,，應(yīng)該先將其切成小塊，做兩次回收或選用大量型回收試劑盒,。 | |
| 電泳緩沖液pH過高 | 硅膠膜在高鹽低pH值時可結(jié)合DNA,，在低鹽高pH值條件下洗脫。如果電泳緩沖液pH值太高,，會導(dǎo)致DNA無法結(jié)合或降低結(jié)合率,，可在溶膠后加入3M NaAc （pH5.2），將pH值調(diào)至7.0以下,。 | |
| 漂洗液中未加入無水乙醇 | *次使用之前應(yīng)該在漂洗液中加入無水乙醇,。漂洗液每次用后應(yīng)該擰緊瓶蓋，以免乙醇揮發(fā),，降低回收率,。 | |
| 洗脫液不合適 | DNA只在低鹽溶液中才能被洗脫，如TE和水,；洗脫液pH值過低會降低洗脫效率,，應(yīng)確保洗脫液pH值在7.0-8.5之間，當(dāng)用水洗脫時確保其pH值在此范圍內(nèi),；洗脫時可將洗脫緩沖液在65-70℃水浴預(yù)熱,，加入洗脫液后在室溫靜置2-5分鐘，可提高洗脫效率,。 | |
| 洗脫液加入位置不正確 | 洗脫液應(yīng)加在硅膠膜中心部位,，確保洗脫液能*覆蓋硅膠膜的表面以達(dá)到大洗脫效率。 | |
| 洗脫體積太小 | 洗脫液體積若小于30μl,，則不易*浸透硅膠膜,，使洗脫效率降低；洗脫液體積若超過200μl,，則所得的DNA濃度會降低,，但DNA總量不會減少。為了得到較高的洗脫效率可以適當(dāng)增大洗脫液體積,。 | |
| 洗脫時間過短 | 洗脫時間對回收率也會有—定影響，洗脫時放置2分鐘可達(dá)到較好的效果,。 | |
| 回收后的片斷無法用于后續(xù)試驗,，如連接等 | 乙醇?xì)埩?/div> | 洗脫時硅膠膜上有漂洗緩沖液殘留，會使洗脫產(chǎn)物中含乙醇,，影響下游操作,，在洗脫之前可通過再次離心或置于50℃烤箱中5-10分鐘，*去除漂洗緩沖液中的乙醇,。 |
| 洗出液中污染有瓊脂糖 | 凝膠未全部溶解 | |
| 洗脫產(chǎn)物有ssDNA,，表現(xiàn)為在瓊脂糖電泳上呈現(xiàn)小的彌散帶,。 | 將洗脫產(chǎn)物95℃加熱2分鐘，慢慢冷卻到室溫,，使單鏈DNA重新退火復(fù)性即可,。 |
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