內毒素清除劑
| 目錄號 | 包裝 | 價格 | 產地 |
| | 50ml | 元 | Solarbio |
| | 100ml | 元 | Solarbio |
產品簡介：
本公司生產的內毒素清除劑主要用于清除DNA、蛋白質或其他液體樣品中的內毒素,。在特定的pH值,、鹽濃度和溫度條件下，內毒素清除劑能與DNA,、重組蛋白以及液體樣品中的內毒素特異性結合,，經過室溫高速離心后,，DNA或蛋白質等保留在水相，而內毒素則被濃縮到極小體積的下層相而被清除,。經過3次以上重復抽提后可將活性為5000～50000 EU/ml的內毒素水平降低到5～0.5 EU/ml以下,，即降低1000～10000倍。本試劑4℃可儲存半年,，-20℃長期儲存,。
操作步驟：
提取前請將內毒素清除劑放在冰上冰浴5min，期間翻轉瓶子數次使試劑均勻預冷,。
1,、a）已純化的質粒DNA內毒素清除：吸取500μl DNA溶液于微型離心管，加入1/10體積3M NaAc pH5.2或1/20體積5M NaCl溶液,，冰浴5min,。
b）在提取質粒DNA過程中清除內毒素：以堿裂解法提取質粒為例，在加入裂解液和中和液并離心去除碎片之后,，吸取含質粒DNA的上清于新離心管中,，冰浴5min。
2,、加入1/5體積預冷的內毒素清除劑,，振蕩混勻，溶液變渾濁,。
3,、冰浴5min，溶液應變清亮,。
4,、37℃水浴5min，不時振蕩,，溶液又變渾濁,。
5、12000rpm室溫離心5min,，溶液應分為兩相,，上層水相含DNA，下層油狀相含內毒素,。
6,、將含DNA的上層水相轉移到新管，棄油狀相,，重復抽提三次,，即重復步驟2-6三次。
7、加入2.5體積無水乙醇,，-20℃沉淀30min或過夜,；12000rpm離心10min，棄上清,；70％乙醇洗滌沉淀,，12000rpm離心5min棄上清；空氣干燥沉淀,，加入100～200μl無內毒素的高純水或TE溶解沉淀,。
8、用內毒素檢測試劑測定樣品中內毒素活性,，并與初始樣品比較,。
注意事項：
1、DNA濃度>1mg/ml時清除內毒素效率降低,。由于DNA和蛋白質本身的性質,，清除程序可導致10-20％DNA丟失，所幸的是與清除內毒素的艱難相比DNA更容易提取制備,。
2,、所有溶液應用無內毒素的高純水配制，所有器械材料均應不含內毒素,，玻璃器皿可高溫烘烤,，非揮發(fā)性水溶液可高壓120℃高溫處理。
內毒素簡介：
內毒素（endotoxin）原稱熱原,，是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜及其它微生物細胞壁的主要組成成分,，其化學本質為脂多糖，主要由O-特異性鏈,、核心多糖和類脂A三部分組成,。脂多糖共價連接到非極性的疏水性類脂A（Lipid A）形成帶負電荷的大分子，同時還具有一個親水性的寡糖核,，因而具有疏水和親水雙重性質,。制備質粒DNA和重組蛋白時，細菌破壁之后將釋放大量脂多糖,。無論是普通制備純化程序,，還是離子交換、凝膠排阻過濾,，甚至是氯化銫超速離心等制備程序,，脂多糖任不可避免地與DNA或蛋白質牢固結合而被共同純化。脂多糖具有強烈的免疫活性和細胞毒性,，并能產生多種復雜的細胞生物學效應，大多數情況下會明顯干擾并產生不可預測的實驗結果,。例如在DNA轉染實驗中,，內毒素競爭性干擾轉染試劑與DNA的結合,，顯著降低轉染效率，并產生明顯細胞毒性降低外源基因表達水平,。
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