| 常見問題 | 可能原因 | 建議解決方案 |
| 洗脫產(chǎn)物的DNA量很少或沒有 | 所提樣品材料老化或反復凍融導致基因組DNA含量下降 | 應選擇新鮮的樣品材料,，如新鮮血液,、新鮮菌液、剛離體的動物組織或幼嫩的植物組織等,，不能即時處理的樣品應立即放入液氮或-70℃低溫保存,，以免DNA降解。 |
| 樣品破壁或裂解不*導致基因組DNA未充分釋放 | 動,、植物材料應在液氮中充分研磨勻漿,，G+細菌、酵母等破壁較困難的樣品應用溶菌酶,、酵母破壁酶或機械方式協(xié)助破壁,，不同樣品的細胞破壁方式可參照前面的詳細介紹。 | |
| 樣品量過多導致細胞裂解不充分 | 加樣量過多使裂解液和樣品混合不均勻,，細胞裂解不充分,。不同來源樣品的加樣量請參照詳細操作步驟。 | |
| DNA吸附不充分 | 如在上吸附柱前末加無水乙醇,，或用低濃度乙醇代替無水乙醇,，則導致DNA不能充分沉淀，與硅膠膜吸附不*,，因此應在樣品裂解后加適量無水乙醇,，再上吸附柱使DNA與硅膠膜充分吸附。 | |
| DNA洗脫不適當 | 洗脫液pH值過低會降低洗脫效率,，應確保洗脫液pH值在7.0-8.5之間,；洗脫體積若小于30μ，則不易*浸透硅膠膜,，使DNA不能全部洗脫下來,，因此洗脫液體積應大于30 μl，同時如洗脫液體積過大,，超過200μl,，則所得的DNA濃度會降低，但DNA總量不會減少,；洗脫時可將洗脫緩沖液在65-70℃水浴預熱,，加入洗脫液后在室溫靜置2-5分鐘，可提高洗脫效率,，提高基因組DNA的產(chǎn)量,。 | |
| 提取的基因組DNA有降解 | 選取的材料不新鮮或反復凍融，采集材料后未及時處理或末低溫保存 | 陳舊血液,、老化菌液等不新鮮的材料中,，細胞凋亡導致DNA降解，或低溫保存的樣品反復凍融導致細胞破碎,，內(nèi)源核酸酶降解DNA,，因此應選擇新鮮的材料樣品,，不能及時處理則低溫保存，運輸過程中亦應使用干冰,。 |
| 未能有效抑制內(nèi)源核酸酶作用 | 某些DNase含量較豐富的動,、植物組織樣品應在液氮中研磨或勻漿，研磨過程中應隨時補充液氮,，并在樣品末*解凍前即加入含有抑制核酸酶作用的鰲合劑的裂解液,。 | |
| 操作過于劇烈導致DNA被機打斷 | 預處理的樣品加入細胞裂解液后，所有操作應盡量柔和,，避免振蕩,、攪拌等劇烈機械力對DNA片段的損傷。 | |
| 提取的基因組DNA中有RNA污染 | 實驗過程中沒有有效使用RNase A | 應嚴格按照實驗操作要求使用,，即加入裂解液的同時加入20μl RNase A溶液,，室溫放置10分鐘。 |
| RNAase A可能失活 | RNase A須在-20℃下保存,，低溫保存時RNase A比較穩(wěn)定,，不易失活，但如果反復凍融會導致RNase A降解失活,，所以應妥善保存,。 | |
| 提取的基因組DNA不能順利地進行后續(xù)試驗 | 樣品量過多導致細胞裂解不充分 | 樣品量過多會使裂解液不能快速有效地與樣品充分混合，從而導致樣品裂解不*,，殘留大量蛋自,、多糖、脂類等雜質(zhì),，為后續(xù)的上吸附柱分離純化造成影響,。應加入適當量的樣品材料，具體數(shù)量請參照詳細操作步驟,。 |
| DNA在洗脫前有大量乙醇殘留 | 有機溶劑乙醇可嚴重抑制內(nèi)切酶,、DNA聚合酶的活性,，而在DNA過柱洗滌過程中需使用含有乙醇的漂洗液,，因此在洗脫DNA前，—定要充分去除殘留的乙醇,，可重復離心,，或?qū)⑽街糜谑覝鼗?0℃溫箱中烘干5-10分鐘，再加洗脫液,。 |
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