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淺析液相色譜儀的使用要點(diǎn)

閱讀:1117        發(fā)布時(shí)間:2014-7-21

效液相色譜儀廣發(fā)應(yīng)用于各種科研,、生產(chǎn)領(lǐng)域中,。 下面我們來(lái)簡(jiǎn)單介紹下它的使用要點(diǎn),。
  1.液相色譜儀色譜柱它包括空柱和填料,??罩莾?nèi)壁拋光的不銹鋼管,內(nèi)徑為4~5mm,,長(zhǎng)100~250mm,。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈,用勻漿法填充固定相,。將此柱裝入儀器的管路中,,用柱式機(jī)械往復(fù)泵輸入新鮮脫氣的流動(dòng)相。等基線平直后可用苯,、萘,、菲的混合試液,用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇:水(83:17)為流動(dòng)相測(cè)定柱效及分離度塔板數(shù)在2~3萬(wàn)/ml以上及分離度在1.5以上者,,柱效好,。為防止柱污染,常用1個(gè) 50mm長(zhǎng),,4~5mm內(nèi)徑,,裝有硅膠(40-50mm)或立柱相同填料的保護(hù)柱(預(yù)柱)接在主柱之前,以延長(zhǎng)色譜柱的壽命,。反相鍵合相柱用畢,。必須用水充分流經(jīng),以洗去鹽類,、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚,,再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。

  2. 液相色譜儀 流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中,,經(jīng)過有濾過頭,、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱,zui后自檢測(cè)器流出或收集或作廢液回收,。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法(isocratic dlution),,即自洗脫開始到結(jié)束,溶劑的配比恒定,。另一類為梯度洗脫法(gradicnt clution),即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過程中逐漸增加,。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比,從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離,,而整個(gè)液相色譜儀色譜過程縮短,。必須注意,梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測(cè)的反相液相色譜法中,。

  3. 液相色譜儀檢測(cè)器適用于血藥濃度的檢測(cè)器有紫外線吸收,,熒光發(fā)射和電化學(xué)三種,。 液相色譜儀紫外檢測(cè)器應(yīng)用于對(duì)紫外光有吸收的藥物,大多數(shù)藥物分子對(duì)紫外光有吸收,,故能較普遍采用,,檢測(cè)限有0.1μg左右。紫外檢測(cè)器有固定波長(zhǎng)型,、可變波長(zhǎng)型及掃描器,,既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測(cè),又能提高測(cè)定靈敏度,,重現(xiàn)性較好,。熒光發(fā)射檢測(cè)器對(duì)能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。80年代應(yīng)用激光替代氙燈光源,,光強(qiáng)度增加了3~4倍,,對(duì)某些藥物的檢測(cè)限可達(dá)pg級(jí)。電化學(xué)檢測(cè)器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池,。常用于檢測(cè)兒茶酚胺類及有酚類基團(tuán)的各種藥物和代謝物,。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池,在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流,,放大后檢測(cè),,檢測(cè)限pg級(jí)。

  4.數(shù)據(jù)處理現(xiàn)代液相色譜儀帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),,除記錄譜外,,還能自動(dòng)記錄峰的保留時(shí)間,能自動(dòng)積分求算峰面積,,并能按照預(yù)定的程序作有關(guān)計(jì)算,,報(bào)告分析結(jié)果。

    掌握液相色譜儀的使用要點(diǎn),,可以讓我們?cè)谑褂弥懈拥目旖?,?jiǎn)便。 
 

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