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液相色譜柱選擇方法
液相色譜柱選擇方法
一,、液相色譜柱選擇方法|液相色譜柱選擇的簡單思路
1.確定分離目的確定你的應用是否要求高分離度,、短分析時間,、高靈敏度,、長柱壽命,，低的操縱本錢等等。
2.評估分析物的化學性質評估分析物的化學性質..諸如化學結構,、溶解性,、穩(wěn)定性等等。
3.選擇合適的色譜柱了解色譜填料的物理和化學性質,。
二,、液相色譜柱選擇方法|液相色譜柱選擇的條件
A填料基質
1.硅膠基質：純度高本錢低，強度大,，化學修飾輕易,，但pH值范圍有限。大多硅膠基質填料在pH2-8之間穩(wěn)定,，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10,。
2.聚合物基質：應用pH值范圍寬，溫度穩(wěn)定（高溫可以達到80度以上）,，機械強度小,。
B顆粒外形
大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒，但有時是不規(guī)則的顆粒,。球形顆粒提供較低的柱壓,、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時;不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對低廉的價格。
C顆粒粒徑
粒徑越小柱效越高,、分離度越高,，但同時會導致較高柱壓降,。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。
D含碳量
含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例,，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關。高含碳量進步柱容量,、分辨率及分析時間,，用于要求高分離度的復雜樣品;低含碳量分析時間短、展現(xiàn)不同的選擇性,，用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品,。一般C18的含碳量在7-19%不等。
E孔徑和比表面積
HPLC吸附介質是多孔的顆粒,，盡大多數(shù)的反應表面于孔內,。因此，分子須進進孔內才能被吸附和分離,。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個概念,。孔徑小比表面積大,，反之亦然,。比表面積大，增加樣品與鍵合相之間的反應,，增加保存,上樣量和復雜成分的分離度;比表面積小,，平衡時間快，適合梯度分析,。
F孔容和機械強度
孔容,，又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小,。它能很好的反應填料的機械強度,。孔體積大的填料相對孔體積小的填料機械強度要略弱,?？左w積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜,。
G封端封端
封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰,。不封端鍵合相相對封端鍵合相會產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品