免疫親和柱的特點及條件優(yōu)化要怎么做
免疫親和柱基于抗原抗體反應,特異性抗體連接在柱體內(nèi),,選擇性吸附樣品中的待檢物,,雜質(zhì)不被吸附,流出柱外,,柱上結合的目標物再被特定的洗脫液洗下來,,可以用于液相色譜分析或者ELISA含量測定,,是一種高效的前處理柱,。
免疫親和柱的特點:
1,、采用單克隆免疫技術,,可以有效性地將待測成分分離出來,分離效率和回收率高,,正確性和可靠性強,。
2、實驗穩(wěn)定性好,,重復性強,。
3,、純化過程簡單快速,,短時間即可處理大量樣品,。
4,、實驗設備輕便,,自動化程度高,操作簡單,,對實驗人員要求不高,可在小型試驗場所使用,。
5、無需有毒溶劑,,實驗過程安全可靠。
6,、應用范圍廣,,可處理多種復雜樣品,。
免疫親和柱的條件優(yōu)化要怎么做:
選擇小柱:根據(jù)基質(zhì)樣品和目標物選擇合適的SP小柱。
活化平衡:活化溶液可以濕潤填料,,滲透鍵合相,消除填料雜質(zhì),,通常和洗脫液一致平衡溶液一般和上樣液接近,,從活化溶液過度到上樣液,,減少上樣回收率損失。
上樣:將提取溶液加入到小柱上,,一般需控制流速在1-2滴/秒,。
淋洗:使用與上樣溶液相同或接近性質(zhì)的溶液沖洗不需要的雜質(zhì),。
洗脫:合適的洗脫溶劑將目標物洗脫下來。
小貼士:
真菌毒素危害極大,,應戴手套操作。
不要使用過了有效日期的。
洗脫液可以直接使用色譜級甲醇洗脫,,但可能會降低回收率。
多毒素檢測中,,嘔吐毒素因為是水溶性,,過柱操作時對有機溶劑耐受性低,,所以組合中包含有嘔吐毒素的前處理方法會相應復雜一些,,前處理方法基本一致。