此類產(chǎn)品是科研用途,，不屬于醫(yī)療器械

生長激素釋放因子（GH-RF）ELISA試劑盒
（美國DRG*，貨號：EIA3429 ）
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預期用途
此試劑盒基于競爭酶免法檢測特異性多肽和相關多肽,。
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實驗原理美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。美國DRG中國*代理，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。
微孔板預包被有第二抗體,，非特異性結(jié)合位點封閉，主要抗體的Fab片段競爭結(jié)合生物素標記的多肽和標準品或樣本中的目的多肽,，二抗則與Fc片段結(jié)合,。生物素標記的多肽與HRP-鏈霉親和素反應，催化底物反應,，黃色強度直接與生物素標記多肽-HRP-鏈霉親和素復合物的量成正比,，但是與標準品或樣本中的多肽量成反比。根據(jù)已知濃度建立標準曲線,，樣本中未知濃度的多肽濃度可直接從標準曲線上讀取,。
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試劑盒組成美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。美國DRG中國*代理，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。

1. 20X的緩沖濃縮液,，50ml

2. 微孔板，96孔

3. 封板紙

4. 主要抗血清,，兔抗多肽IgG,，1支

5. 標準品，1支

6. 生物素標記多肽,，1支

7. HRP-鏈霉親和素,，30ul

8. 陽性質(zhì)控，2支

9. 底物液,，12ml

10. 終止液,，2N鹽酸，15ml

11. 坐標紙

12. 說明書

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實驗所需材料但試劑盒未提供美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。美國DRG中國*代理，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。

1. 酶標儀（450nm）

2. 振蕩器,，300-400rpm

3. 洗板系統(tǒng)

4. 多通道移液器，50-100ul

5. 溶液貯存瓶

6. 吸水紙

7. 采血管（可選）

8. 抑肽酶,，0.6TIU/ml血液（可選）

9. 緩沖液A（可選）

10. 緩沖液B（可選）

11. C18分離柱

注意：打開試劑和試驗開始前先將其平衡至室溫（20-23℃）,，強烈建議稀釋過的溶液盡快使用，采血步驟見盒子內(nèi)的采血說明書,，每個盒子所含成分足夠用于96人份檢測或40人份的雙孔檢測,。
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實驗步驟美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒。美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。

1. 實驗前認真閱讀說明書，所有試劑平衡至室溫（大約25-45min）

2. 用950ml的去離子水稀釋20X的緩沖濃縮液,，得到1X的試驗緩沖液,，用于稀釋其他試劑和樣本。注意：如果20X的緩沖液出現(xiàn)了結(jié)晶,，可在水浴鍋內(nèi)加熱使其*溶解,，使用前*混勻

3. 用1X的緩沖液稀釋，離心標準品,，振蕩,。Stock solution的濃度為1000ng/ml，室溫下放置至少10min,，至*溶解,。使用前離心，振蕩,。美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒。美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。

標準品準備如下美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒。 美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。
編號          標準品的量            緩沖液的量             濃度
Stock           1000ul                ----                    1000ng/ml
#1             100ul的Stock          900ul                  100 ng/ml
#2             100ul的#1             900ul                  10 ng/ml
#3             100ul的#2             900ul                  1ng/ml
#4             100ul的#3             900ul                  0.1 ng/ml
#5             100ul的#4             900ul                  0.01 ng/ml

1. 用5ml的1X的緩沖液稀釋主要抗體，放置至少5min,，至*溶解,，*混勻

2. 用5ml的1X的緩沖液稀釋生物素標記多肽，放置至少5min,，至*溶解,，*混勻

3. 200ul的1X緩沖液稀釋質(zhì)控，放置至少5min,，至*溶解,，*混勻

4. 將A1和A2孔作為空白對照（Blank）

5. 在B1和B2孔內(nèi)加50ul的1X緩沖液，作為Total Binding

6. 將配制好的標準品由#5到#1各50ul依次加入至C1和C2—G1和G2孔內(nèi),，注意,，標準品需做雙份檢測

7. H1和H2孔加入50ul已稀釋的陽性質(zhì)控，注意,，陽性質(zhì)控也要做雙孔檢測

8. 將50ul樣本加入至相應孔內(nèi),，做雙孔檢測

9. 除空白孔外（Blank well），每孔加25ul的已稀釋的主要抗體

10. 除空白孔外（Blank well）,，每孔加25ul的已稀釋的生物素標記多肽,，注意，不建議生物素標記多肽或主要抗血清加樣時使用多通道移液器

11. 蓋板,，室溫,，300-400rpm下孵育2小時

12. 在3000-5000rpm下將HRP-鏈霉親和素離心5秒，然后取12ulSA-HRP和12ul 1X的緩沖液混勻

13. 移取蓋板,，倒去反應液

14. 每孔350ul 1X緩沖液洗板4次,，吸水紙上拍干

15. 每孔加100ul的SA-HRP

16. 蓋板，室溫,，300-400rpm下孵育1小時

17. 移取蓋板

18. 同步驟17）

19. 每孔加100ul的TMB底物液

20. 蓋板,，室溫，300-400rpm下孵育1小時

21. 移取蓋板,，每孔加100ul的2N 鹽酸終止反應,。溶液顏色由藍色變黃色，如未出現(xiàn)統(tǒng)一的顏色變化,，用手輕輕拍板,，使其*混勻，20分鐘內(nèi)進行下一步驟

22. 酶標儀450nm處讀數(shù)

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結(jié)果計算美國DRG中國*代理，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒。
在半對數(shù)坐標紙上繪制標準曲線,。標準品的濃度為X軸,，相應的OD值為Y軸，用四參數(shù)或?qū)?shù)-對數(shù)法繪制zui合適的標準曲線,。濃度與OD值成反比關系,，隨著標準品濃度的增加，黃色強度就減少,，即OD值減少
樣本濃度可直接從標準曲線上讀取,。如果樣本實驗前進行了稀釋，則zui后結(jié)果應乘以相應的稀釋因子
標準曲線為逆向S型曲線美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。 美國DRG中國*代理，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。

附：采用全自動酶標儀檢測，只需檢測前設置好酶標儀的相關參數(shù),，如坐標參數(shù)（線性,，半對數(shù)）和計算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程）,，即可直接得到結(jié)果,。美國DRG中國*代理，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。
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貯存美國DRG中國*代理，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒。

1. 收到貨后貯存于4℃

2. 強烈建議盡快使用配制的試劑

3. 1X緩沖液貯存于4℃

4. 將不用的微孔板放回至密封袋內(nèi)密封起來,，貯存于4℃

5. 已稀釋的標準品,，生物標記物,，抗體和HRP貯存于4℃

樣本采集的建議美國DRG中國*代理，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒。
血液采集美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。美國DRG中國*代理，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。
用含有EDTA的采血管采集血液,，每管可裝7ml，采到了抗凝血液后立即搖晃幾次,，將血液從采血管轉(zhuǎn)至含抑肽酶的離心管,，不斷搖晃，抑制蛋白酶活性,，1600xg轉(zhuǎn)速,，4℃下離心15min，,，收集血漿,，血漿樣本可在-70℃下保存1個月。如果采血管可用于離心,，可直接將抑肽酶加入至采血管內(nèi),。美國DRG中國*代理，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。
血漿中提取多肽美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒。美國DRG中國*代理,，生長激素釋放因子ELISA試劑盒,。

1. 用等量的緩沖液A酸化血漿，如1ml的血漿加入1ml的緩沖液A,，混勻,，6000-17000xg下，4℃離心20min

2. 分離柱內(nèi)含200mg的C18,，依次用緩沖液A（3ml ,，3次）和緩沖液B（1ml，1次）,，使其平衡

注意：步驟3-5中不能對分離柱施加任何壓力

1. 將酸化的血漿倒入至預平衡的C18分離柱內(nèi)

2. 用緩沖液A（3ml,，2次）慢慢洗柱，倒去洗液

3. 用緩沖液B（3ml，1次）慢慢洗提多肽,，收集至塑料管內(nèi)

4. 用離心濃縮機或其他方法將洗提液蒸干

5. 將抽提物直接貯存于-20℃,，并盡快進行試驗，用1X的緩沖液直接配制,。如果多肽濃度不在檢測范圍內(nèi),，就直接進行稀釋或濃縮

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