人骨橋蛋白(OPN)酶免試驗試劑盒

（日本IBL  27158）

簡介

骨橋蛋白（OPN）來源于骨基質，是一種分泌型糖蛋白,。目前已發(fā)現多個細胞分泌高酸性的鈣結合的糖基化磷蛋白,，包括骨細胞，腎小管細胞,，巨噬細胞,，活化的T細胞和血管平滑肌細胞。分子量的大小取決于其糖基化和磷酸化程度,，范圍為66~44kDa

OPN的一個重要特點是含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）序列,，如纖維蛋白，連蛋白和其他胞外蛋白,，通過該序列可與細胞表面整合素受體結合,，如αvβ3

另一重要特點，由于RNA連接,，糖基化,，磷酸化，硫酸化和對蛋白酶的敏感度不同,，OPN在機體內以多種分子形式存在,。OPN和凝血酶同時存在于受傷，炎癥,，血管再生和腫瘤組織位點,。OPN易水解，這一過程可能有著重要的生理學意義,。OPN片段的氨基末端含有一個隱藏的結合位點,，可識別整合素α9β1,，而且OPN還含有多個細胞結合位點，與多個受體反應,；這些反應都有著不同的功能

實驗原理

此人骨橋蛋白（OPN）27158酶免檢測試劑盒根據酶免法的夾心原理，利用兩種不同的高特異性抗體,，TMB作為著色劑,，顏色強度與人OPN的量成正比

兩種抗體如下：

包被抗體：抗人OPN(O-17)兔IgG，抗體反應部分,，人OPN的N-端標記抗體

HRP標記的抗人OPN（10A16）小鼠IgG Fab’,， 抗體反應部分，人OPN凝血酶裂解位點的右側

檢測范圍

5~320ng/mL(76.9~4920pg/mL)

預期用途

僅供研究,，不能用于診斷

1. 此人骨橋蛋白（OPN）27158酶免檢測試劑盒可用于EDTA-血漿,，尿液或細胞上清中人OPN的體外定量檢測。由于OPN分子是不穩(wěn)定的蛋白,，請在使用前將其儲存于-80℃,，放置室溫或反復凍融會使檢測值降低

2. 建議EDTA-血漿樣品用EIA緩沖液或PBS5~10倍的稀釋，如果5~10倍的稀釋還是超出了zui高標準品值,，則需進一步稀釋

3. 血清或肝素血漿樣品的檢測結果可能不是正確值,，因為OPN不穩(wěn)定，易被凝血酶裂解,，而且OPN分子上有若干個肝素結合位點,，所以肝素血漿也會影響試驗

4. 建議尿液樣品用EIA緩沖液或PBS200倍稀釋，但各實驗室應*化稀釋率,。由于尿液樣品易分解,，建議加入PMSF（蛋白酶抑制劑）等。樣品采集后不能立即檢測,，應貯存于-80℃或更低,，避免反復凍融，否則其檢測值降低,。尿液中OPN的量與尿液的體積成反比,，建議用肌酸酐補償進行檢測

5. 細胞上清的稀釋比例因細胞而異，各實驗室以*化稀釋比例稀釋

6. 此試劑盒不能檢測凝血酶裂解的人OPN

7. 重組的和天然的人OPN都可用此試劑盒檢測

試劑盒組成

1. 包被板,，96孔,，包被有抗人OPN（O-17）兔IgG，親和純化

2. 標記抗體濃縮,，30X,，0.4mlx1，HRP標記的抗人OPN（10A16）小鼠IgG Fab’,，親和純化

3. 標準品,，0.5mlx2,，重組人OPN

4. EIA緩沖液，30mlx1,，0.05%吐溫20的PBS

5. 標記抗體稀釋液,，12mlx1,1%BSA，含0.05%吐溫20的PBS

6. 著色劑,，15mlx1,，TMB底物液

7. 終止液，12mlx1,，1N硫酸

8. 洗滌緩沖濃縮液,，50mlx1, 40X，含0.05%吐溫20的磷酸緩沖液