當前位置：首頁 >> 資料下載 >> 組胺ELISA Kit使用說明書

組胺ELISA Kit使用說明書

時間：2011-10-12閱讀：1962

提供商
深圳市科潤達生物工程有限公司
資料大小
58.5KB
資料圖片
下載次數(shù)
501次
資料類型
WORD 文檔
瀏覽次數(shù)
1962次

點擊免費下載該資料

組胺ELISA Kit使用說明書

（德國IBL：RE59221）

1、應(yīng)用范圍

此試劑盒可用于人血漿和尿液中組胺的體外定量檢測,。深化此實驗可用于細胞培養(yǎng)上清液的研究。

2、前言說明

組胺（β-咪唑乙胺）是人體中zui重要的介質(zhì)，它主要存在于過敏反應(yīng)的起始階段（速發(fā)型過敏）,。組胺是由組胺酸經(jīng)脫氨基作用產(chǎn)生的,。組胺幾乎存在于機體的所有組織中,，主要儲存于柱狀細胞和嗜堿性粒細胞的異染性顆粒中。組胺通常都是以無活性的復(fù)合體性存在,，只有當需要的時候才會釋放,。像其它的介質(zhì)一樣，組胺不僅能調(diào)節(jié)過敏反應(yīng)的各種臨床癥狀,，也可以調(diào)節(jié)終止過敏反應(yīng)的一系列效應(yīng),。組胺在組織中的生物活性是通過三種受體來完成的，它們分別是H1,，H2和H3受體,。臨床檢測組胺的方法有：定量檢測各種速發(fā)型過敏反應(yīng)中嗜堿性白細胞釋放組胺的量，也可以檢測過敏藥物治療后各種體液（血漿,，尿液,，細胞培養(yǎng)上清）中組胺的量,。

3、實驗原理

此ELISA試劑盒利用的是競爭法的原理,。樣品中未知量的抗原和一定量的酶標抗原競爭性結(jié)合到包被在微孔中的抗體結(jié)合位點上,。溫育后洗板以終止競爭反應(yīng)。加入底物液后,，溶液所顯示的顏色強度與樣品中抗原的量成反比,。樣品的實驗結(jié)果可以從標準曲線上直接獲取。

4,、儲存與穩(wěn)定性

試劑盒必須在2-8℃的環(huán)境下運輸和儲存,，避免太陽直射。樣品的儲存與穩(wěn)定性及試劑準備將在相關(guān)章節(jié)中闡述,。如果將包被板密封并儲存于2-8℃的環(huán)境下時,，試劑在有效期內(nèi)穩(wěn)定。

5,、樣品的采集與儲存

血漿（EDTA,，肝素）

按照靜脈穿刺的常規(guī)注意事項采集樣品，血液樣品自采集到實驗時都必須保證其化學完整性,。不要使用明顯溶血,、黃疸和脂血樣品?；鞚岬臉悠窇?yīng)當在實驗開始前離心以除去所有的顆粒性物質(zhì),。
儲存	2-8℃	≤-20℃	≤-70℃	避免太陽直射，避免反復(fù)凍融,。
穩(wěn)定性	5小時	3個月	2年	避免太陽直射，避免反復(fù)凍融,。

尿液

實驗必須使用自然產(chǎn)生的尿液,，也可使用24小時內(nèi)產(chǎn)生的尿液。收集病人24小時內(nèi)產(chǎn)生的尿液,，并混合于含10-15ml 6N HCl防腐劑的容器中,。為了計算結(jié)果，請確定尿液的總體積,。實驗開始前請先將樣品離心,。
	自然的尿液	酸化尿液		避免太陽直射，避免反復(fù)凍融,。
儲存	2-8℃	2-8℃	≤-20℃
穩(wěn)定性	8小時	3天	6個月

細胞培養(yǎng)上清

使用細胞培養(yǎng)上清作樣品,，一般沒特殊注意事項

細胞培養(yǎng)基內(nèi)的組胺濃度可能稍微要高些。

全血

全血中組胺釋放量的檢測必須用肝素化全血,，具體信息請見相應(yīng)的說明書（RE95000）

6,、試劑盒成分

注意：試劑盒有足夠做96份單孔檢測或48份雙孔檢測所需的試劑成分

數(shù)量	標記	成分
1×12×8	MTP	包被板，可拆，微孔中包被了羊抗兔抗血清,。
1×5ml	ANTISERUM	組胺抗血清,，藍色，即用,，內(nèi)含：兔抗血清,、Tris緩沖液和0.01%的硫柳汞
1×75ul	ENZCONJ CONC	酶聯(lián)物，200倍濃縮,，內(nèi)含辣根過氧酶標記的組胺,。
7×0.4ml	CAL P A-G LYO	血漿標準品A-G，凍干,，用于血漿樣品的定標,。內(nèi)含：組胺、人血漿,。具體濃度請見試劑瓶標簽或質(zhì)控單,。
2×0.4ml	CONTROL P1+2 LYO	血漿質(zhì)控1+2，凍干,，內(nèi)含：組胺,、人血清。具體濃度及可允許范圍請見試劑瓶標簽,。
1×2.0ml 5×0.25ml	CAL U/C A-F	尿液/細胞培養(yǎng)標準品A-F,，0;2.7;8.1;24.3;73;219ng/ml,即用，用于尿液和細胞培養(yǎng)樣品的定標,。內(nèi)含：組胺和0.1M的HCl,。
2×0.25ml	CONTROL U/C 1+2	尿液質(zhì)控1+2，即用,，內(nèi)含：組胺,、人尿液（酸化的）。具體濃度及可允許范圍請見試劑瓶標簽,。
1×2.25ml	ACYLREAG	?；噭从?，內(nèi)含：DMF
1×60ml	ASSAYBUF CONC	檢測緩沖液,，5倍濃縮，內(nèi)含Tris緩沖液,、吐溫、BSA和0.05%的硫柳汞,。
1×50ml	WASHBUF CONC	洗滌液,，20倍濃縮，內(nèi)含磷酸緩沖液、吐溫和0.1%的硫柳汞,。
1×10ml	INDICATORBUF	指示緩沖液,，紫色，即用,，內(nèi)含：Tris緩沖液,、苯酚（pH＜7.5時顏色會發(fā)生改變＝和0.1%的硫柳汞。
1×12ml	TMB SUBS	TMB底物液,，即用,，內(nèi)含TMB、緩沖液和穩(wěn)定劑,。
1×12ml	TMB STOP	TMB終止液,，即用，1M的H₂SO₄,。
3×	FOIL	粘性金屬板

7,、實驗所需器材但試劑盒不提供

1）移液器，體積：10;20;50;100;1000ul

2）試管（12×75mm）

3）試管架

4）振蕩器

5）旋渦混合器（500rpm）

6）帶儲器的8道移液器

7）洗滌瓶,，自動或半自動洗板機

8）酶標儀（參考波長：600-650nm）

9）蒸餾水或去離子水

10）吸水紙,、取樣吸頭和計時器

8、實驗前的準備說明

注意	96人份的試劑盒可分成三份分別進行檢測,，下述體積為檢測32人份時所需要的體積,。

8.1凍干或濃縮成分的準備

稀釋/溶解	成分		稀釋劑	比例	備注	儲存	穩(wěn)定性
20ml	檢測緩沖液	100ml	蒸餾水	1：5		2-8℃	2周
15ml	洗滌液	300ml	蒸餾水	1：20	18-25℃將晶體溶解掉	2-8℃	4周
	血漿標準品	0.4ml	蒸餾水		靜置15min,混合時無泡沫	-20℃	1個月
	血漿質(zhì)控品	0.4ml	蒸餾水		靜置15min,混合時無泡沫	-20℃	1個月
10ul（*）	酶聯(lián)物	2ml	檢測緩沖液	1:200	臨時配置,只能使用一次	18-25 ℃	30分鐘

（*）在稀釋前,確保塞子內(nèi)無殘留液體.

8.2樣品的稀釋

樣品中組胺濃度高于zui高標準品的樣品,應(yīng)當在酰化前用相應(yīng)的稀釋液稀釋,尿液樣品用0.1M的HCl,血漿樣品用樣品稀釋液（Cat.no. KEHP711）,試劑盒內(nèi)未提供,。

8.3樣品的?；?/span>

用試管準備樣品

注意	不能血漿標準曲線確定酰化尿液或細胞培養(yǎng)樣品中組胺的濃度,也不能用U/C標準曲線確定?；獫{樣品中組胺的濃度.

8.3.1血漿

1	將血漿標準品,、血漿質(zhì)控品和病人樣品分別100ul加入到相應(yīng)的試管中。
2	在每一試管中加入100ul指示緩沖液,，旋渦混合,。
3	在每一試管中加入20ul酰化試劑,，加入?；噭┖罅⒓葱郎u混合。
4	將試管蓋好,，室溫（18-25℃）溫育30分鐘,。
5	在每一試管中加入750ul已稀釋好的檢測緩沖液，旋渦混合,。

8.3.2尿液,，細胞培養(yǎng)上清

1	將U/C標準品、尿液質(zhì)控品和病人尿液或細胞培養(yǎng)上清分別50ul加入到相應(yīng)的試管中。
2	在每一試管中加入50ul指示緩沖液,，旋渦混合,。如果指示劑變成無色，說明溶液的pH值很低,，樣品中含有很多酸性物質(zhì),。在這種情況下，再向試管中加入50ul指示緩沖液直至溶液略帶微紅,。
3	在每一試管中加入10ul?；噭尤膈,；噭┖罅⒓葱郎u混合,。
4	將試管蓋好，室溫（18-25℃）溫育30分鐘,。
5	在每一試管中加入2000ul已稀釋好的檢測緩沖液,，旋渦混合。

注意：?；幚砗玫臉悠房稍?span lang="EN-US">2-8℃下存放一晚,，-20℃環(huán)境下可存放2天。

9,、實驗步驟

1	將?；幚磉^的標準品、質(zhì)控品和病人樣品分別50ul加入到相應(yīng)的微孔中,。
2	在每一微孔中加入50ul臨時配置好的酶聯(lián)物,。
3	在每一微孔中加入50ul組胺抗血清。
4	蓋板,，振蕩器（500rpm）上室溫溫育3小時,。
5	移去粘性金屬板，棄取孔內(nèi)反應(yīng)物,，每孔用250ul稀釋好的洗滌液洗板4次,，吸水紙上拍干以除去殘余液體。
6	如果有條件的話,，可以用8道移液器加底物液和終止液,。加底物液和終止液時，每孔的時間間隔應(yīng)當相同,。使用主動置換型移液器并避免氣泡產(chǎn)生,。
7	在每一微孔中加入100ul TMB底物液。
8	血漿：振蕩器（500rpm）上室溫溫育40min,。尿液/細胞培養(yǎng)上清：振蕩器（500rpm）上室溫溫育20min,。
9	在每一微孔中加入100ul TMB終止液以終止底物反應(yīng),。輕輕振板使溶液混合均勻,。
10	加終止液后15min內(nèi)450nm處讀取OD值,。（參考波長：600-650nm）

10、期望值

實驗結(jié)果不能當作任何治療結(jié)果的*原因,，疾病的判斷還應(yīng)當與其它臨床觀察和診斷檢測相結(jié)合,。以下結(jié)果為正常人群的正常值（5%-95%），建議每個實驗室讀確定自己的正常值范圍：

血漿	尿液
	24小時尿液	自然產(chǎn)生的尿液
ng/ml	ug/d	ug/g肌酐酸
0.2-1.0	5-56	8-53

本譯文僅供參考,，詳情請以原文為準,。

中國*總代理：深圳市科潤達生物工程有限公司

辦公地址：深圳市蛇口太子路18號海景廣場11C

研發(fā)中心：深圳市蛇口沿山路10號6層

：,26680196 郵政編碼：518067

免費：

組胺ELISA Kit使用說明書

會員登錄

收藏該商鋪

提示