本公司新推出的全新細(xì)菌基因組純化試劑盒，操作簡(jiǎn)便,，純化量大,，可純化革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌的基因組DNA。
細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒使用說(shuō)明
本試劑盒可用于革蘭氏陰性和陽(yáng)性菌的基因組DNA提取,，由細(xì)菌重懸液,、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液組成,?？蓮?/span>1-5ml菌液中提取基因組DNA。整個(gè)提取過(guò)程不超過(guò)45分鐘,。提取過(guò)程包括：1菌液離心,，重懸。2裂解菌體,，釋放基因組DNA,。3鹽析沉淀蛋白，分離DNA,。4異丙醇沉淀脫鹽并濃縮,。5 70%乙醇清洗，晾干并用DNA溶解液溶解,。本試劑盒采用復(fù)合裂解液,，其中含有抑制DNA酶的成分，在加熱（65°C）狀態(tài)下,，可保證完整的細(xì)菌基因組DNA的充分裂解釋放,，本試劑盒即可提取異丙醇沉淀時(shí),，罕見(jiàn)渾濁的蛋白質(zhì)雜質(zhì)的共沉淀。提取的基因組可用于PCR擴(kuò)增,、內(nèi)切酶消化以及膜雜交等,。
一、 試劑盒組成（本試劑盒提供的組份, 至少可提取100份1-5ml菌液基因組DNA的純化,，每種組份均有足夠的富余量）
1． 復(fù)合裂解液：30ml´1瓶,。
2． 蛋白沉淀液：300ml´1瓶。
3． DNA溶解液：20ml´1瓶,。
4． 操作說(shuō)明書(shū)一份,。
二、 本試劑盒未提供,，須用戶自備的試劑為：異丙醇,，70%乙醇（國(guó)產(chǎn)分析純）。
三,、 提取操作：
1． 菌液離心：取革蘭氏陰性菌菌液1-2ml,；或者革蘭氏陽(yáng)性菌菌液2-5ml，1000rpm離心1分鐘,。
2． 加入細(xì)菌重懸液100ul,，震蕩使菌體重懸。
3． 將復(fù)合裂解液置65°C水浴加熱,，使結(jié)晶成分溶解,，每個(gè)細(xì)菌重懸液中分別加入300ul的復(fù)合裂解液。
4． 混璇器震蕩混勻10秒,，置65°C水浴中反應(yīng)10分鐘（革蘭氏陰性菌）,，20分鐘（革蘭氏陽(yáng)性菌）。
5． 各管中加入300ul蛋白沉淀液,。上下顛倒5-6次使兩者混勻,。
6． 13000-16000×g, 離心3-5分鐘。
7． 將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中（注意：由于有些細(xì)菌含有多糖或者脂蛋白成分,，離心后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞成分上浮的情況,，此時(shí)取漂浮層下的均一透明液體），加入等體積異丙醇,，此時(shí)可見(jiàn)透明的絮狀物,，混勻后離心，同步驟5,，吸去上清,。
8． 離心管中加入200ul，70%的乙醇溶液,，來(lái)回倒置,，清洗管壁,，離心同上。
9． 移去70%乙醇,，倒置離心管于干凈的濾紙上,，自然干燥10-15分鐘，加入DNA溶解液100ul,。
10．快速漩渦震蕩1-2秒,，使DNA溶解液沖刷到所有沉淀的DNA。
11．將純化的全血基因組置65ºC水浴1小時(shí),，或4ºC過(guò)夜使DNA充分溶解（要求不嚴(yán)格的PCR試驗(yàn)可縮短時(shí)間或省去該步）,，輕輕彈動(dòng)管壁有助于溶解基因組DNA可直接進(jìn)行PCR等下一步操作。
四,、注意事項(xiàng)：
1. 用戶可選擇使用RNase A, 使用方法為：在第3步完成后1.5ul RNase A, 混勻后，37ºC孵育15分鐘,，冷卻至室溫,。（RNase A的配法：將RNase A溶于TE buffer中，濃度為4mg/ml, 煮沸10分鐘,，以去除DNase, 分裝后-20ºC保存,；也可購(gòu)買(mǎi)配好的試劑使用。）
2. 革蘭氏陽(yáng)性菌由于細(xì)胞壁的存在,，純化的量較陰性菌要少一倍以上,。
3. 提取得DNA樣本在70%乙醇中，存于-80ºC,，可長(zhǎng)期保存,。
五、儲(chǔ)存條件：本試劑盒在室溫條件下可保存一年,。
