白喉棒狀桿菌毒素ELISA檢測試劑盒通常采用雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），具體操作步驟如下：
一,、檢測原理
通過預先包被白喉棒狀桿菌抗原的微孔板，依次加入待測樣本,、辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體,，經(jīng)溫育后徹底洗滌，加入底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶催化下轉(zhuǎn)化為藍色,，最終在酸作用下變?yōu)辄S色,，通過酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值比較,，判定樣本中白喉棒狀桿菌毒素抗體的存在,。
二、操作步驟
樣本準備
血清/血漿：收集后3000轉(zhuǎn)離心10分鐘分離血清或血漿,，避免溶血和高脂樣本,。
保存條件：若不立即檢測，樣本需分裝后凍存于-20℃,，避免反復凍融,，室溫解凍并充分混勻。
試劑準備
試劑盒平衡：試劑盒于2-8℃保存,，使用前室溫平衡20分鐘,。
洗滌液稀釋：濃縮洗滌液用蒸餾水按1:20或1:50稀釋（根據(jù)試劑盒說明）。
加樣與溫育
設置對照孔：陰,、陽性對照孔各加入50μL對照液,。
樣本孔：加入50μL稀釋后的樣本。
加入檢測抗體：每孔加入100μLHRP標記的檢測抗體,，封板膜封住反應孔,，37℃水浴或恒溫箱溫育60分鐘。
洗滌
棄去液體,，每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩去,，重復5次（或用洗板機洗滌）,。
顯色與終止
每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15分鐘,。
每孔加入50μL終止液，15分鐘內(nèi)于450nm波長測定OD值,。
三,、結(jié)果判斷
試驗有效性
陽性對照孔OD值平均值≥1.00，陰性對照孔OD值平均值≤0.15,。
臨界值計算
臨界值（Cutoff）=陰性對照孔平均值+0.15,。
結(jié)果判定
陰性：樣本OD值<臨界值。
陽性：樣本OD值>臨界值,。
四,、注意事項
操作規(guī)范
實驗中不用的板條應立即放回自封袋密封保存。
所有液體組分使用前需充分搖勻,，避免產(chǎn)生氣泡,。
安全防護
避免直接接觸終止液和底物A、B，若接觸需立即用水沖洗,。
實驗中禁止吃喝,、抽煙或使用化妝品。
儀器與設備
需配備450nm酶標儀,、高精度加樣器及槍頭,、37℃恒溫箱。
試劑保存
試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實驗或人體實驗,。
試劑盒需2-8℃避光防潮保存，嚴格按照說明書操作,。
五,、試劑盒優(yōu)勢
高敏感性與特異性：歐盟CE認證，不與其他可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應,。
操作簡便：即用型試劑,，適用于手動或自動化檢測系統(tǒng)。
臨界值質(zhì)控：提供質(zhì)控品,，確保檢測結(jié)果準確可靠,。
六、應用領(lǐng)域
疾控中心,、科研實驗室,、醫(yī)院等機構(gòu)用于白喉棒狀桿菌毒素抗體的檢測，輔助白喉疾病的診斷與流行病學調(diào)查,。
通過上述方法,，可高效、準確地檢測樣本中白喉棒狀桿菌毒素抗體的存在,，為白喉的防控提供科學依據(jù)
