腎綜合征出血熱ELISA 試劑盒
 

    腎綜合征出血熱（以下簡稱出血熱）是由漢坦病毒引起的一種自然疫源性疾病,，是《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病,。
  我國每年腎綜合征出血熱發(fā)病人數(shù)占世界報道的漢坦病毒感染病例的90%以上，是受漢坦病毒危害zui為嚴重的國家,。我國大陸的31個省,、市、自治區(qū)均有病例發(fā)生,。我國年發(fā)病數(shù)zui高曾超過11萬,，近十年來我國年報告發(fā)病人數(shù)一直在2～5萬左右，新疫區(qū)不斷出現(xiàn),，并時有暴發(fā)流行,，老疫區(qū)的類型也有所變化。
   因此,，開展腎綜合征出血熱的流行病學(xué)監(jiān)測具有十分重要的意義,，德國IBL公司進口原裝的腎綜合征出血熱ELISA試劑盒，已通過歐洲CE認證,，可對出血熱調(diào)查及血清學(xué)檢測提供可靠的依據(jù),。
 

試劑盒詳細信息:

德國IBL*，貨號：RE57451

（德國IBL中國*代理商“深圳科潤達生物工程有限公司”竭誠為您服務(wù)） 
 

預(yù)期用途
此酶免試劑盒可用于流行性出血熱（EHF）病人血清中抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的定性檢測,。
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前言簡介
流行性出血熱（EHF）又稱腎病綜合征出血熱（HFRS）,，是由漢坦病毒（Hantaan type）引起的。與流行性腎病相比（因近距離接觸普馬拉病毒而被傳染）,，HFRS的傳染性更嚴重,，一般都會伴隨有尿毒癥、呼吸麻痹和伴隨有典型休克綜合癥的出血,，甚至死亡,。這種疾病起初的癥狀是流行性感冒樣癥狀。HFRS起初的典型癥狀是血小板減少癥和白細胞增多癥。漢坦病毒主要分布于亞洲和巴爾干各邦地區(qū),，通過直接接觸嚙齒動物,、嚙齒動物的排泄物或分泌物而傳染給人。士兵,、農(nóng)民和露營者都特別容易受到危險,。
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實驗原理
包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測IgM抗體時,，為了避免由IgG抗體或類風(fēng)濕因子引起的非特異性因素的干擾,，病人血清必須與類風(fēng)濕因子IgG吸附劑一起孵育。
實驗過程孵育期間,，抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會結(jié)合到固相包被板上,。洗板后，我們分別用過氧化酶標記的抗人IgG和IgM抗體檢測特異性的IgG和IgM,。加入底物液后顯色,，溶液所顯示的顏色強度與結(jié)合的抗體量成正比。之后用酶標儀讀取OD值,。
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貯存及穩(wěn)定性
試劑盒應(yīng)當(dāng)在2~8℃運輸和儲存,，避免高溫和陽光直射，沒有打開的試劑能保存到有效期,。包被條在封閉的袋子內(nèi)2~8℃能保存到有效期,。準備好的試劑的儲存及其穩(wěn)定性在相應(yīng)章節(jié)已闡明。
開封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期
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樣品采集和貯存
人血清

注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項,。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測時都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)整體性,。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品,。如果樣品出現(xiàn)混濁,，則在實驗前應(yīng)當(dāng)離心以除去所有的微粒物質(zhì)。此試驗要采用人血清樣本
儲存	2-8℃	≤-20℃	避免熱源和太陽直射,，避免反復(fù)凍溶,。
穩(wěn)定性	5天	12mon

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試劑盒成分

規(guī)格	符號	成分
1 x 12 x 8	MTP	微孔反應(yīng)板 即用,可分拆.預(yù)包被有重組漢灘型抗原（strain: CG 76-118）
1 x 750 µL	ANTI IgG CONJ CONC	酶聯(lián)物（20倍濃縮） 過氧化酶標記抗IgG
1 x 750 µL	ANTI IgM CONJ CONC	酶聯(lián)物（20倍濃縮） 過氧化酶標記抗IgM
1 x 1.5 mL	CONTROL + IgG	陽性質(zhì)控IgG 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 1.5 mL	REFCONTROL IgG	參考對照質(zhì)控IgG 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 1.5 mL	CONTROL + IgM	陽性質(zhì)控IgM 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 15 mL	DILBUF CONC	樣品稀釋緩沖液（20倍濃縮） 紅色瓶蓋.內(nèi)含:PBS,，pH7.4，清潔劑和0.01%的硫柳汞
1 x 1.5 mL	REFCONTROL IgM	參考對照質(zhì)控IgM 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 1.9 mL	CONTROL-	陰性質(zhì)控 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 100 mL	WASHBUF CONC	洗滌液（10倍濃縮） 內(nèi)含:PBS緩沖液
1 x 1.5 mL	RE-AB	類風(fēng)濕因子吸附劑 即用.內(nèi)含抗-人IgG, 穩(wěn)定劑,防腐劑
1 x 12 mL	TMB SUBS	TMB底物液 即用.內(nèi)含:TMB
1 x 12 mL	TMB STOP	TMB終止液 即用.內(nèi)含0.5 M 硫酸
1 x	FOIL	膠粘薄膜

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實驗做需器材但試劑盒沒提供
 

• 微移液管  體積（5; 20; 50; 100; 200; 1000 µL）
• 渦旋混合器
• 保溫箱, 37°C
• 試管（用于樣品稀釋）
• 8道微量移液器
• 洗瓶,自動或半自動洗板機
• 酶標儀
• 雙蒸水或去離子水
• 吸水紙,吸嘴,計時器

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實驗前準備
實驗前將試劑盒平衡至室溫（18-25°C）.含結(jié)晶的緩沖濃縮液可在37°C下迅速將其溶解.實驗前將其冷卻至至室溫（18-25°C）
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稀釋濃宿成分的準備（以測32孔為例）
提示:實驗前取所需量試劑,并迅速用于稀釋.

濃縮液 （示例）	組分	體積	稀釋液	比例	備注	存儲	穩(wěn)定性
3mL	DILBUF CONC	57mL	去離子水	1:20	充分混勻	2-8°C	1周
10 mL	WASHBUF CONC	90 mL	去離子水	1:10	充分混勻	2-8°C	8周
200 µL	ANTI IgG CONJ CONC OR ANTI IgM CONJ CONC	3.8 mL	稀釋洗滌液	1:20	充分混勻	-	實驗結(jié)束后倒掉

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樣品稀釋

	稀釋		比例	備注		穩(wěn)定性
IgG樣品	常規(guī)	稀釋樣品稀釋液	1:201	10 µL+2000 µL	2-8°C	6周
IgM樣品	常規(guī)	稀釋樣品稀釋液	1:201	10 µL+2000 µL （加15 µL類風(fēng)濕因子吸附劑至250 µL稀釋血清樣品, 18-25°C孵育30分鐘）	2-8°C	6周

提示:未稀釋樣品可于-20°C下保持數(shù)月
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實驗步驟
1將100μl即用型陽性質(zhì)控,、陰性質(zhì)控、參考對照質(zhì)控和稀釋血清樣品（如是IgM樣品,需用類風(fēng)濕因子吸附劑前處理）加入到相應(yīng)的微孔中,。
2膠粘薄膜蓋板,，37℃下溫育45分鐘。
3移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液,，重復(fù)洗板4次,，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
4每孔中加入100μl稀釋酶聯(lián)物（IgG 或IgM）
5膠粘薄膜蓋板,。37℃下溫育45分鐘.
6移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液,，重復(fù)洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴,。
7加底物液和終止液,建議用8道微移液器,保證加液相等的時間間隔,。避免產(chǎn)生氣泡。
8每孔中加入100μl TMB底物液
9室溫（18-25°C）溫育10分鐘
10每孔中加入100μl終止液終止底物液反應(yīng),。
1120分鐘內(nèi)于酶標儀450nm處讀取OD值,。（參考波長：650nm）
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8,、結(jié)果計算
用病人樣品的OD值比上參考對照質(zhì)控的OD值計算檢驗結(jié)果
A_病人樣品/ A_{參考對照質(zhì)控}= Q
 
 

• IgG抗體：

Q＜1	陰性：沒有檢測到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgG抗體
1≤Q≤1.5	可疑灰色區(qū)域，不能明確說明結(jié)果,，10天之后應(yīng)當(dāng)對疾病的病程進行再次檢測,。如果疑似病人感染了漢坦病毒，我們建議您對檢測的樣品也檢測下漢灘病毒（Hantaan）IgM抗體或檢測下普馬拉（Puumala）病毒抗體,。
Q＞1.5	陽性：檢測到抗?jié)h灘病毒特異性IgG抗體

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• IgM抗體：

Q＜1	陰性：沒有檢測到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgM抗體
1≤Q≤2	可疑灰色區(qū)域,，不能明確說明結(jié)果，10天之后應(yīng)當(dāng)對疾病的病程進行再次檢測,。如果疑似病人感染了漢灘病毒,，我們建議您對檢測的樣品也檢測下普馬拉病毒（Puumala）抗體。
Q＞2	陽性：檢測到抗?jié)h坦病毒特異性IgM抗體

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本譯文僅供參考,，詳情請以原文為準,。
 
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