醛固酮ELISA試劑盒
德國IBL*,，貨號(hào)：DB52001
德國IBL中國*代理商“深圳科潤達(dá)生物工程有限公司”竭誠為您服務(wù)
1,、應(yīng)用范圍
此ELISA試劑盒可用于人血清和尿液中醛固酮的定量檢測,。注：僅供體外診斷用。
2,、實(shí)驗(yàn)原理
此ELISA試劑盒采用的是典型的競爭法,。標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣品中的未標(biāo)記抗原和酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合包被板上有限的抗體結(jié)合位點(diǎn),。洗板以除去未結(jié)合的物質(zhì),。洗板后，加入酶底物液,。zui后加入終止液以終止酶反應(yīng),，并在酶標(biāo)儀上讀取OD值。包被孔中溶液所顯示的顏色與樣品中醛固酮的量成正比,。實(shí)驗(yàn)中所用的標(biāo)準(zhǔn)品可作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,，我們可以直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣品和質(zhì)控品中醛固酮的量。
3,、臨床應(yīng)用
醛固酮是一種有效的鹽皮質(zhì)激素,，這種鹽皮質(zhì)激素的合成和分泌都會(huì)受到體內(nèi)腎素-血管緊張素系統(tǒng)的調(diào)控。醛固酮可促進(jìn)腎遠(yuǎn)曲小管對(duì)鈉的重吸收,，從而可以保鈉排鉀,，進(jìn)而控制循環(huán)血溶量。醛固酮長期分泌過多會(huì)引起高血壓,。血清醛固酮的檢測加上血漿腎素水平的檢測通常都用來區(qū)分原發(fā)性和續(xù)發(fā)性醛固酮增多癥,。
| 分類 | 血清醛固酮 | 血漿腎素 |
| 原發(fā)性醛固酮增多癥 | 低 | 高 |
| 續(xù)發(fā)性醛固酮增多癥 | 高 | 高 |
醛固酮的檢測再加上選擇性抑制和刺激實(shí)驗(yàn),，我們可以將原發(fā)性醛固酮增多癥分為兩種基本類型：
1）由腎上腺瘤（一個(gè)或兩個(gè)）引起的原發(fā)性醛固酮增多癥。
2）由腎上腺增生引起的原發(fā)性醛固酮增多癥,。
這種分類對(duì)于疾病的治療與處理具有重要作用,。腎上腺瘤一般對(duì)外科手反應(yīng)良好，而腎上腺增生在醫(yī)學(xué)上更好處理,?？偟谜f來，用ELISA方法檢測血清醛固酮是高血壓鑒別診斷的一個(gè)重要輔助工具,。
4,、樣品的采集與儲(chǔ)存
血清：進(jìn)行一次雙份檢測大概需要0.2ml血清。采集4-5ml血液到相應(yīng)的標(biāo)記試管中,，并待其凝血,，離心獲取血清。4℃下可穩(wěn)定存放24個(gè)小時(shí),，如果實(shí)驗(yàn)過幾天再做,，可將樣品凍存-10℃的環(huán)境或更低溫度下。
尿液：進(jìn)行一次雙份檢測大概需要0.2ml尿液,。將24小時(shí)尿液收集到相應(yīng)的樣品容器中,。4℃理可穩(wěn)定存放24小時(shí)，如果實(shí)驗(yàn)過幾天再做,，可將樣品凍存于-10℃或更低溫度的環(huán)境下,。將所有的人樣品都當(dāng)作潛在的生物有害物質(zhì)，處理時(shí)應(yīng)當(dāng)特別小心,。
5,、樣品預(yù)處理
血清：此檢測系統(tǒng)是一直接檢測系統(tǒng)，不需要進(jìn)行任何樣品預(yù)處理,。
尿液：使用前用尿液稀釋液按1：50的比例稀釋尿液樣品,。例如：用1ml尿液稀釋液稀釋20μl尿液樣品。
6,、實(shí)驗(yàn)所需器材但試劑盒不提供
1）移液器,，50；100,；150和300μl
2）取樣吸頭
3）蒸餾水或去離子水
4）搖床
5）酶標(biāo)儀
6）尿液稀釋液（如果用尿液樣品做實(shí)驗(yàn),，就得稀釋樣品），用于尿液樣品的稀釋,。
7,、試劑盒成份
1）兔抗醛固酮抗體包被的可拆包被板，即用,。內(nèi)含：抗醛固酮抗體包被的96孔包被板,，密封于含干燥劑的包半裝袋中,，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期,。
2）HRP標(biāo)記的醛固酮酶聯(lián)物,，50倍濃縮型,，內(nèi)含：HRP標(biāo)記的醛固酮酶聯(lián)物,、蛋白緩沖液和無汞防腐劑，體積：300μl/支,，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下,，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期，制備：使用前用檢測緩沖液按1：50的比例進(jìn)行稀釋（例如：40μl HRP酶聯(lián)物中加入2ml檢測緩沖液,。如果整個(gè)包被板都使用,，可以用12ml檢測緩沖液稀釋240μl HRP酶聯(lián)物，棄去剩余試劑,。
3）醛固酮標(biāo)準(zhǔn)品,，即用。6支,，內(nèi)含：醛固酮,、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用血清和一定量的醛固酮制備而成,。下表為標(biāo)準(zhǔn)品的大概濃度,，具體濃度請(qǐng)見試劑瓶標(biāo)簽：
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 濃度 | 體積/支 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 A | 0 pg/ml | 2.0 ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 B | 15 pg/ml | 0.6 ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 C | 50 pg/ml | 0.6 ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 D | 200 pg/ml | 0.6 ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 E | 500 pg/ml | 0.6 ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 F | 1000 pg/ml | 0.6 ml |
儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上有效期,，一旦打開,，所有的標(biāo)準(zhǔn)品都必須在14天內(nèi)用完或?qū)⑵鋬龃妫苊夥磸?fù)凍融,。
4）質(zhì)控品,，即用，1支,，內(nèi)含：醛固酮,、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用緩沖液和一定量的醛固酮制備而成,，具體濃度及可接受范圍請(qǐng)見試劑瓶標(biāo)簽,。體積：0.6ml/支，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下,，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期,，一旦打開，所有的質(zhì)控品都必須在14天內(nèi)用完,，必免反復(fù)凍融,。
5）濃縮冼滌液,，10倍濃縮型，1支,，內(nèi)含：緩沖液,、非離子型去垢劑和無汞防腐劑，體積：50ml/支,，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下,，有效期：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期，制備：使用前用蒸餾水或去離子水按1：10的比例進(jìn)行稀釋,，如果整個(gè)包被板都使用,，可用450ml蒸餾水稀釋50ml濃縮冼滌液。
6）檢測緩沖液,，即用,，1支，內(nèi)含：蛋白緩沖液和無汞防腐劑,，體積：15ml/支,，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期。
7）TMB底物液,，即用,，1支，內(nèi)含：TMB,、過氧化氫和非DMF或DMSO,，體積：16ml/支，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下,，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期,。
8）終止液，即用,，1支,，內(nèi)含：1M的硫酸，體積：6ml/支,，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃環(huán)境下,，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期。
8,、實(shí)驗(yàn)步驟
樣品預(yù)處理：
血清：無
尿液：使用前用尿液稀釋液按1：50的比例進(jìn)行稀釋,。
使用前必須將所有的試劑都平衡到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品,、質(zhì)控品和樣品都必須作雙份檢測,，一旦實(shí)驗(yàn)開，所有的步驟都必須完整的進(jìn)行下去,。
1）制備好即用型的HRP酶聯(lián)物和檢測緩沖液,。如果用尿液作實(shí)驗(yàn),，應(yīng)將尿液稀釋好。
2）取出所需數(shù)目的板條,，將不用的板條重新密封于包裝袋中并冷藏,。
3）將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品（血清或已稀釋好的尿液）分別50μl加入到相應(yīng)的微孔中（雙份檢測）
4）在每一微孔中加入100μl酶聯(lián)物（建議您使用多道移液器）,。
5）室溫環(huán)境下,，在包被板搖床上（200rpm）溫育1個(gè)小時(shí)。
6）每孔用300μl洗滌液洗板3次,，并在吸水紙上拍干,。
7）以相同的時(shí)間間隔,，在每一微孔中加入150μl TMB底物液,。
8）室溫環(huán)境下，在包被板搖床上溫育15-20分鐘,。
9）在每一微孔中加入50μl終止液,。
10）加終止液后20分鐘內(nèi)450nm處讀取OD值。
*如果OD值超過450nm濾光片的檢測上限,，我們可用405n或415nm代替,，OD值可能會(huì)比較低，但它并不會(huì)影響樣品和質(zhì)控品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
9,、結(jié)果計(jì)算
1）計(jì)算兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品OD值的平均值。
2）在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上,，以平均OD值為Y軸,、標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為X軸作一條校準(zhǔn)曲線。如果使用免疫檢測軟件,，我們可以作四參數(shù)曲線,。
3）計(jì)算每一未知樣品OD值的平均值。
4）直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣品的濃度,。
5）將獲得的樣品濃度值乘以稀釋因子,。然后乘以24小時(shí)尿液的體積，從而其閃單位可變?yōu)閜g/24小時(shí),。zui后將pg/24小時(shí)除以106,，相應(yīng)的單位就變成μg/24小時(shí)。
6）如果血清樣品濃度高于1000pg/ml,我們可以用標(biāo)準(zhǔn)品A將其進(jìn)行稀釋（但稀釋比例不高于1：8）,。則其結(jié)果應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋因子,。如果尿液樣品的濃度高于1000pg/ml，我們可以用尿液稀釋液對(duì)其進(jìn)行稀釋（但稀釋比例不能高于1：2）,，zui后其結(jié)果也應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子,。
轉(zhuǎn)換因子：
pg/ml×2.744＝pmol/L pmol/L=nmol/L×1000
10,、參考值
正常血清參考值
對(duì)于所有的臨床檢驗(yàn)來說，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)收集數(shù)據(jù)并建立自己的正常值范圍：
| 人群 | 范圍（pg/ml） |
| 鹽攝入量未受限制,，坐立采集樣品的人群 | 10-160 |
| 鹽攝入量未受限制,，站立采集樣品的人群 | 40-310 |
正常尿液參考值
對(duì)于所有的臨床檢驗(yàn)來說，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)收集數(shù)據(jù)并建立自己的正常值范圍：
| 人群 | 范圍（ug/24h） |
| 鹽攝入量未受限制,，坐立采集樣品的人群 | 5-19 |
本譯文僅供參考,，詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。
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