細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果操作不當(dāng)或者條件控制不合適見容易受到化學(xué)或者生物因素的污染,常見的污染源有:
1.細(xì)菌污染
細(xì)菌污染是實驗室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染,,即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素,,也可能因為操作不慎而引起污染。常見的有革蘭氏陽性菌,,如枯草桿菌以及大腸桿菌,、假單胞菌等革蘭氏陰性菌,其中又以白色葡萄球菌較常見,。
培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后,,會出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁,,pH改變,。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變,胞內(nèi)顆粒增多,、增粗,,變圓脫落死亡。
2.真菌污染
真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的一種,,常見的真菌有煙曲霉,、黑曲菌、孔子霉,、毛霉菌,、白色念珠菌和酵母菌。
培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后,,可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點(diǎn),,有的散在生長,培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁,;倒置顯微鏡下可見絲狀,、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中,有的呈鏈狀排列,。
真菌污染后,,細(xì)胞生長變慢,但由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡,。
3.支原體污染
支原體是介于細(xì)菌與病毒之間能獨(dú)立生活的小微生物,,小直徑0.2μm,,一般過濾除菌無法去除它,光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu),。開始不易發(fā)現(xiàn),,能在偏堿條件下生存,對青霉素有抗藥性,。多吸附于細(xì)胞表面或散在于細(xì)胞之間,。
培養(yǎng)細(xì)胞受支原體污染后,部分敏感細(xì)胞可見細(xì)胞生長增殖變慢,,部分細(xì)胞變圓,,從瓶壁脫落。但多數(shù)細(xì)胞污染后無明顯變化,,或略有變化,,若不及時處理,還會產(chǎn)生交叉污染,。
4.病毒污染
組織細(xì)胞培養(yǎng)過程中,,如果沒有除去潛在的病毒,就會產(chǎn)生病毒污染,。目前,,從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。
盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng),,但生產(chǎn)疫苗是不安全的,。因此,潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗,、干擾素等生物制品制作中的難題,。
5.非同種細(xì)胞污染
由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yán)格分開,往往會使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染,。目前,,世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染,致使許多實驗宣告無效,。