做細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn),,細(xì)胞鋪板大概是常見(jiàn)的一個(gè)實(shí)驗(yàn),。但是有很多人不是很得要領(lǐng),鋪得不是很均勻:要么中間密周?chē)?,要么周?chē)苤虚g禿頂,。怎么辦呢?以下來(lái)自豐壽技術(shù)人員詳細(xì)解析,,請(qǐng)收好了,!
一般96孔板,每孔是加100微升細(xì)胞懸液,,從孔的左邊靠近底部加入,,加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下再繼續(xù)加剩余的半邊板子,,都加完后蓋上蓋子,,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,,注意把握力度(我一般輕巧敲三下),,太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)(逆時(shí)針效果不好),,依次敲擊剩余三個(gè)邊,,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱。
6孔板,、12孔板或24孔板,,均可采用將個(gè)孔加入少量無(wú)血清培養(yǎng)基,晃動(dòng)浸潤(rùn)整個(gè)孔底,,然后用移液槍吸至第二孔,,同樣方法浸潤(rùn)孔底,其它孔一次類(lèi)推,,這樣整個(gè)孔底都是濕潤(rùn)的,細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底,,加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間,,中間細(xì)胞多,而加在周邊晃勻后會(huì)出現(xiàn)周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象,,細(xì)胞分散較均勻,,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。
細(xì)胞懸液加完后,,將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,,對(duì)著燈光,從底部往上看,,看細(xì)胞有沒(méi)有抱團(tuán),。然后從底部敲擊,使之分散,。如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話(huà),,建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下,效果不錯(cuò),,振幅小,,頻率高。
細(xì)胞要盡量打散,,大部分呈單個(gè)狀態(tài),。離心后,要充分懸浮,。還有轉(zhuǎn)移到六孔板后,,需要晃動(dòng),晃的時(shí)候不要讓細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,,不然細(xì)胞就全被帶到中間去了,,就會(huì)不均勻。
一瓶細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)后,,正常處理,,在培養(yǎng)瓶里吹勻,然后鋪6孔板,,每孔2毫升,,鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭,,然后放到培養(yǎng)箱里,輕微的左右前后各三圈,?;旧?4小時(shí)之后再觀察,每孔的細(xì)胞都會(huì)很均勻,。
計(jì)算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量,,混勻后,加到六孔板里,,六孔板按橫8字型晃,,顯微鏡下觀察,如果不均勻,,按上述方法再晃,。如果細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話(huà),在種六孔板的過(guò)程中,,隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子,。
放在水平板面上先上下移動(dòng),再左右移動(dòng),,每個(gè)方向5到6次,,但關(guān)鍵的是搖晃后直接放入培養(yǎng)箱中,不要再做過(guò)多的運(yùn)動(dòng),,例如放到鏡下去看,,否則很容易就又聚到中間去了。