實(shí)驗(yàn)動物細(xì)菌學(xué)監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

時間：2010-1-20閱讀：3084

1. 標(biāo)本的采集
正常動物細(xì)菌檢測主要檢查呼吸道和腸道,，分別取氣管分泌物及腸內(nèi)容物做細(xì)菌培養(yǎng)檢查,。對于發(fā)病動物,，采取其病變組織和臟器做細(xì)菌學(xué)檢查。
2. 細(xì)菌的培養(yǎng)
細(xì)菌是單細(xì)胞的原核生物,，絕大部分都可以在人工培養(yǎng)基上進(jìn)行繁殖,，只有少數(shù)例外，如泰澤病原體需在活細(xì)胞中繁殖,。不同細(xì)菌種類所要求的zui適生長條件不盡相同,，有些細(xì)菌需在有氧的環(huán)境下才能生長，稱為需氧菌,；有些只能在無氧環(huán)境下生長,，稱為厭氧菌,；還有一些細(xì)菌在有氧、無氧環(huán)境下都可以生長,，稱為兼性厭氧菌,。
培養(yǎng)細(xì)菌的目的，是從不純的被檢材料中找出特定的細(xì)菌或全部細(xì)菌,，這一過程稱為分離培養(yǎng),。如果只是培養(yǎng)性質(zhì)明確的一種細(xì)菌，則稱為純培養(yǎng),。為了從被檢材料中分離出所要檢查的細(xì)菌,，可以利用多種性質(zhì)不同的選擇性培養(yǎng)基，檢查各種不同的目的細(xì)菌,。
（1）培養(yǎng)基的種類：按物理性狀可把培養(yǎng)基分為液體培養(yǎng)基,、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基三種。
（2）細(xì)菌培養(yǎng)的方法：培養(yǎng)細(xì)菌的目的不同,，其方法也不盡相同,，通常把細(xì)菌的培養(yǎng)方法分為一般培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法三種：
①一般培養(yǎng)法一般培養(yǎng)法又稱需氧培養(yǎng)法,，將已接種好的平皿,、斜面或液體培養(yǎng)基等，置于37℃孵育箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h,，一般細(xì)菌即可于培養(yǎng)基上生長,。但也有少數(shù)生長緩慢的細(xì)菌，需培養(yǎng)2～7d甚至更長時間才能生長,。
②二氧化碳培養(yǎng)法某些細(xì)菌如腦膜炎奈毖氏菌,、布魯桿菌及肺炎支原體等，需要在一定的二氧化碳環(huán)境下才能良好生長,，即二氧化碳培養(yǎng)法,，常用的有二氧化碳培養(yǎng)箱、燭缸法,、重碳酸鈉—鹽酸法,。
③厭氧培養(yǎng)法有些細(xì)菌只能在無氧環(huán)境下生長，即厭氧培養(yǎng)法,，目前常用的厭氧培養(yǎng)法有厭氧罐法,、氣袋法及厭氧箱等。
3. 細(xì)菌的鑒定和分類
把獲得純培養(yǎng)的細(xì)菌進(jìn)行一系列生物學(xué)特性的檢查,，并確定其分類學(xué)上的位置,，這個過程叫細(xì)菌鑒定。細(xì)菌生物學(xué)性狀包括菌落形態(tài),、菌體形態(tài),、染色性質(zhì),、生化反應(yīng)以及血清學(xué)反應(yīng)特性和特異性噬菌體等。
細(xì)菌的分類是根據(jù)其營養(yǎng)方式及各種生物學(xué)特性親緣關(guān)系,，將細(xì)菌劃分為不同的門,、綱,、目,、科、屬,、種,，其基本分類單位是種。
（1）菌落形態(tài)：菌落的特征是識別細(xì)菌的重要依據(jù),，觀察菌落特征時應(yīng)注意：邊緣是整齊的,、還是鋸齒的，表面是光滑的,、還是粗糙的,，中間是突起的、還是凹陷的,，是透明的,、還是半透明或不透明的。如乙型溶血性鏈球菌,，在血瓊脂平皿上,，菌落灰白色，圓形,，中央稍凸起,，透明或半透明，表面光滑,，菌落周圍可見透明的溶血環(huán),。而綠膿桿菌，在選擇性培養(yǎng)基（NAC）上菌落扁平,，邊緣不整齊,，大小不一，表面濕潤,、有光澤,，菌落周圍有藍(lán)綠色或褐色色素擴(kuò)散，但也有不產(chǎn)生色素的菌株,。這些菌落特征在細(xì)菌的鑒定中均有一定意義,。
（2）細(xì)菌的生化反應(yīng)特性：各種細(xì)菌具有各自*的酶系統(tǒng)，因而在代謝過程中所產(chǎn)生的分解與合成代謝產(chǎn)物也不同,。這些代謝產(chǎn)物又各具不同的生化特點(diǎn),。根據(jù)此特點(diǎn),，利用生物化學(xué)方法來鑒別不同細(xì)菌，稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗(yàn),。生化反應(yīng)試驗(yàn)方法很多,，主要有以下幾種：
①糖（醇）類發(fā)酵試驗(yàn)：是鑒定細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗(yàn)中zui主要的試驗(yàn)，不同細(xì)菌可發(fā)酵不同的糖類,，如沙門菌可發(fā)酵葡萄糖,，但不能發(fā)酵乳糖，大腸桿菌則可發(fā)酵葡萄糖和乳糖,；即使兩種細(xì)菌均可發(fā)酵同一種糖類,，其發(fā)酵結(jié)果也不盡相同，如志賀菌和大腸桿菌均可發(fā)酵葡萄糖,，但前者僅產(chǎn)酸,，而后者則產(chǎn)酸、產(chǎn)氣,，故可利用此試驗(yàn)鑒別細(xì)菌,。
②葡萄糖代謝類型鑒別試驗(yàn)：可用于葡萄球菌與微球菌的鑒別。
③β-半乳糖苷酶試驗(yàn)（ONPG）：分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)為陽性,，如埃希氏菌屬,、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬和沙雷氏菌屬等,。而不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌如沙門菌,、變形桿菌和腸桿菌科中其他不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)均為陰性。
④其他生化試驗(yàn)：如淀粉水解試驗(yàn),、七葉苷水解試驗(yàn),、甲基紅試驗(yàn)及VP試驗(yàn)等。
（3）革蘭氏染色法：染色除能觀察細(xì)菌形態(tài)外,，還可根據(jù)其染色反應(yīng),，將細(xì)菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌兩大類。如沙門菌屬,、志賀菌屬,、巴斯德桿菌及耶爾森菌等均為革蘭氏陰性菌，革蘭氏陽性菌有肺炎鏈球菌,、單核細(xì)胞增生性李斯特桿菌,、金黃色葡萄球菌、鼠棒狀桿菌等,。
（4）血清學(xué)鑒定：除生化鑒定外,，必要時可進(jìn)行血清學(xué)鑒定。如沙門菌屬、志賀菌屬,、綠膿桿菌,、耶爾森菌等均可做血清學(xué)分型試驗(yàn)。
根據(jù)送檢動物的不同級別,，對所需檢查的病原菌進(jìn)行逐項(xiàng)排查,，zui后得出檢測結(jié)論。

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