1,、高山壓恒流泵
特點(diǎn):雙泵頭串聯(lián)式
微機(jī)控制 通過(guò)鍵盤(pán)設(shè)定參數(shù)(時(shí)間,、流量,、壓力,、淋洗液比例)。
單相閥,、活塞,、閥座均為寶石耐磨損;密封圈為特種塑料耐高壓。
10種工作程序 具有過(guò)壓保護(hù),、斷電保護(hù)及自診斷等功能,。
可作單泵恒流輸出或雙泵梯度淋洗。
創(chuàng)新:為了消除壓力波動(dòng),,凸輪曲線以阿基米德螺旋線為基線再加以修正,;采用混合式4相8拍步進(jìn)電機(jī),并由細(xì)分16步的驅(qū)動(dòng)器驅(qū)動(dòng),;增加機(jī)械微調(diào)和特制的緩沖器,;實(shí)時(shí)微機(jī)控制,壓力及時(shí)反饋,,從而消除壓力波動(dòng),,攻克了長(zhǎng)期阻撓我國(guó)
2,、紫外
分光檢測(cè)器特點(diǎn):
- 先進(jìn)的光學(xué)系統(tǒng)
全息凹面光柵,、光纖分光構(gòu)成全新概念的雙光束分光。
- 微機(jī)控制
鍵盤(pán)設(shè)定控制步進(jìn)電機(jī)調(diào)動(dòng)光柵選定波長(zhǎng)(固定波長(zhǎng),、局部掃描、全程自動(dòng)掃描,、單步和能量測(cè)試)
創(chuàng)新:紫外分光檢測(cè)器是
液相色譜儀關(guān)鍵之所在,,而靈敏度是紫外分光檢測(cè)器的關(guān)鍵之所在。為了降低噪音提高靈敏度,,我們開(kāi)發(fā)出*的光路系統(tǒng):采用全息凹面光柵,,不用反射鏡(反射一次損失20%光能),通過(guò)光纖分光去除雜散光簡(jiǎn)化了光路,;利用微機(jī)進(jìn)行基線跟蹤和噪聲處理,。這樣不僅減少了光能量傳輸損耗,保證zui大光能量,;而且大大提高了信噪比,,保證了靈敏度高、穩(wěn)定快,。
3,、色譜分離柱
3-1 柱的結(jié)構(gòu)
1、堵棒(或?qū)Ч埽?,、接頭 3,、接頭 4、密封圈 5,、螺帽 6,、柱密封圈 7、柱管 8,、柱填料 9 10,、過(guò)濾片
3-2 柱的分類:
根據(jù)所有的擔(dān)體材料分為三種:
a.硅膠型:機(jī)械強(qiáng)度高,,易制成小顆粒,理論塔板數(shù)高,。
b.聚全物型:在廣泛的PH值范圍內(nèi)穩(wěn)定
c.羥基磷灰石型:對(duì)蛋白質(zhì)等生物高分子樣品有特殊的選擇性,。
根據(jù)分離方式分類:
a.硅膠型
1) 正相:SIL--磷脂、NH--糖,、維生素E,,CN--甾類激素。
2) 反相:ODS(C18),、(C8 CN TMS Pheny1)低分子量化全物,。
3) 離子交換:
WAX(弱堿陰離子交換)--核苷酸、蛋白質(zhì)
WCX(弱酸陽(yáng)離子交換)--蛋白質(zhì)
SAX(強(qiáng)堿陰離子交換)--核苷酸
SCX(強(qiáng)酸陽(yáng)離子交換)--兒茶酚膠
4)凝膠過(guò)濾:
Diol--蛋白質(zhì) GF--蛋白質(zhì)
b.聚合物型:
1)反相:ODP--50--肽,,蛋白質(zhì),,低分化合物。
2)離子交換:ISC--氨基酸,,胍類化合物,,ISA--糖,IC--無(wú)機(jī)離子,,PA--蛋白質(zhì),,ES--蛋白質(zhì)。
3)配位交換:SCR(磺化聚苯乙烯)--糖,。
4)離子排阻:SCR-101H 102H--有機(jī)酸
5)凝膠過(guò)濾:ION--多糖 GS--水溶性分子
6)凝膠滲透色譜(GPC):GPD--合成分子,、橡膠。
7)羥基磷灰石型:HPC--蛋白質(zhì),、核苷酸
按尺寸分類:
1.制備:30mm 50mm 內(nèi)徑,,半制備:20mm內(nèi)徑。
2.分析:標(biāo)準(zhǔn)型柱:4_8mm內(nèi)徑,。
快速色譜柱:3mm內(nèi)徑,、5cm長(zhǎng)、4.6mm內(nèi)徑,。
小孔徑柱:2.5mm內(nèi)徑,,微孔徑柱1mm內(nèi)徑。
3-3柱的技術(shù)指標(biāo)
*耐壓:不小于40Mpa,。
*滲透性:反相--流動(dòng)相甲醇1ml/min,,壓力3Mpa。
正相--正乙烷1ml/min,壓力3Mpa.
*柱效:理論塔板極數(shù)>3x10
3,。
*對(duì)稱柱:葸峰不對(duì)稱因子AS在0.8~2.0范圍內(nèi),。
*外觀:光潔、標(biāo)牌、尺寸,、填充劑,、流動(dòng)相方向、日期等
ODS柱
ODS(C18)色譜柱是將十八烷基鍵合在擔(dān)體的表面,,然后填充的柱,,在HPLC中應(yīng)用廣。在HPLC中反相色譜的引用占70%,,其中極大部分 使用的是ODS(C18),。本公司所附的柱也是ODS(C18)柱,內(nèi)徑4.6mm,長(zhǎng)度150mm,。
一般反相色譜系統(tǒng),,流動(dòng)相為極性溶劑,如水,、甲醇,、乙腈,非極性固定相,,如十八烷基,。反相系統(tǒng)簡(jiǎn)單,重復(fù)性好,,柱子能長(zhǎng)期穩(wěn) 定工作,,能完成分離、分析任務(wù)的60-80%,,所以分析工作者使用得zui多的是反相柱。
柱的使用和維護(hù)
由于柱的質(zhì)量直接影響到樣品組分得分離情況,,組分的定性,,定量分析,所以在操作時(shí)必須十分注意,。
通常柱子損壞表現(xiàn)為:柱壓升高,,柱效下降,保留值改變,,峰形崎變等,。
以反相為列,它要求填料處于甲醇或乙腈中,,不使柱子干枯,,并注意下列事項(xiàng):
* 勿使柱子受較強(qiáng)振動(dòng)
* 較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí),應(yīng)在柱中充滿甲醇,,并把兩頭封死,,盡量不使干枯。
* 當(dāng)用水和甲醇(或乙腈)混合液體溶劑時(shí),工作結(jié)束后必須用純甲醇沖洗30分鐘至1個(gè)小時(shí),,使柱子處于甲醇中,,因水 易繁殖微生物, 使柱子堵塞,,并降低柱效,。
* 當(dāng)使用KH
2PO
4等緩沖液時(shí),鹽的濃度宜低,,否則鹽容易析出,,柱效降低,柱壓升高,,使用后 必須用水沖洗( 絕不能用甲醇沖洗)使緩沖液全部溶于水排出,,然后再用甲醇沖洗。
* 硅基固定相不宜在PH>8時(shí)使用,,此時(shí)容易產(chǎn)生絮狀物析出,,堵塞柱子。
* 當(dāng)流動(dòng)相呈酸性時(shí),,使用后必須用水沖洗,,因酸使柱效降低,后再用甲醇沖洗,。
* 流動(dòng)相經(jīng)過(guò)過(guò)濾處理,。
* 樣品也經(jīng)過(guò)過(guò)濾處理。
* 樣品有時(shí)能復(fù)蓋填料得活性點(diǎn),,使柱壓升高,,保留時(shí)間下降,防止方法是樣品經(jīng)過(guò)過(guò)濾,。
* 樣品組分的不可逆吸附,,使柱壓升高,柱效降低(通常易被吸附的有蛋白質(zhì),、糖)防止方法是加保護(hù)柱和溶劑反沖,, zui常用的是四氫呋喃。
* 當(dāng)流動(dòng)相從A換到B時(shí),,A,、B不相溶,必須選擇一能同A,、B互溶劑C,,先換成C再把C換成B,zui常用的中間液是異丙醇,。
* 由于長(zhǎng)期使用,,在較大的壓力下,,擔(dān)體破裂而流失在柱前端形成一段空隙,使柱效下降,,峰形畸變,。維護(hù)方法:卸下 接頭,用甲醇把填料調(diào)成糊狀,,填入柱內(nèi),,同時(shí)將過(guò)濾片用超聲波清洗機(jī)清洗一次