液相色譜柱通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱,，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團(tuán)的鍵合相硅膠柱,；反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)（ODS）稱(chēng)為C18柱,，其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等,。另外還有離子交換柱,，GPC柱，聚合物填料柱等,。本文重點(diǎn)介紹反相色譜柱的選擇和使用：
一,、反相色譜柱的選擇
1．柱子的PH值使用范圍
     反相柱優(yōu)點(diǎn)是固定相穩(wěn)定，應(yīng)用廣泛,，可使用多種溶劑,。但硅膠為基質(zhì)的填料，使用時(shí)一定要注意流動(dòng)相的PH范圍,。一般的C18柱PH值范圍都在2-8,，流動(dòng)相的PH值小于2時(shí)，會(huì)導(dǎo)致鍵合相的水解,；當(dāng)PH值大于7時(shí)硅膠易溶解,；經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況,，色譜柱人口處會(huì)塌陷,。同樣填料各種不同牌號(hào)的色譜柱不盡相同。如果流動(dòng)相PH較高或經(jīng)常使用緩沖液時(shí),，建議選擇PH范圍大的柱子,，例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。
2．填料的端基封尾（或稱(chēng)封口）
     把填料的殘余硅羥基采用封口技術(shù)進(jìn)行端基封尾,，可改善對(duì)極性化合物的吸附或拖尾,；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分離,；填料穩(wěn)定性好了，組分的保留時(shí)間重現(xiàn)性就好,。如果待分析的樣品屬酸性或堿性的化合物,，選用填料經(jīng)端基封尾的色譜柱。
二,、液相色譜柱的使用
    色譜柱在使用前,，進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái),，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考,。在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測(cè)試所使用的條件是*條件），只有這樣,，測(cè)得的結(jié)果才有可比性,。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相,、柱溫等條件的差異而有所不同,。
1,、樣品的前處理
a、使用流動(dòng)相溶解樣品,。
b,、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不  可逆吸附的雜質(zhì)。
c,、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì),。
2、流動(dòng)相的配制
    液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
a,、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中（或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中）,。
b,、流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)
c、流動(dòng)相的黏度要盡量小,，以便得到好的分離效果,；降低柱壓降，延長(zhǎng)泵的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度）,。
d,、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器,，使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制,。
e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,，否則容易產(chǎn)生氣泡,，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。   
f,、在流動(dòng)相配制好后,，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
3、流動(dòng)相流速的選擇
    因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù),，使用不同的流速可得到不同的柱效,。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求*柱效,，使用*流速,。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min,，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,，流速0.8ml／min為佳,。
    當(dāng)選用*流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng),?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）,。
注意：
a．含水流動(dòng)相在實(shí)驗(yàn)前配制,，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過(guò)夜。加入*,，防止細(xì)菌生長(zhǎng),。
b．流動(dòng)相要求使用0.45 μm濾膜過(guò)濾，除去微粒雜質(zhì),。
c．使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相,，使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，提高柱性能,。,、
三． 色譜柱的維護(hù)
1. 色譜柱的平衡 
     反相色譜柱由工廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱,。請(qǐng)一定確保您分析樣品所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶,。 每天用足夠的時(shí)間以流動(dòng)相來(lái)平衡a. 平衡開(kāi)始時(shí)將流速緩慢地提高,，用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對(duì)試劑流速如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡）
b. 如果使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽,，應(yīng)注意用純水"過(guò)渡"即每天分析開(kāi)始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡,； 分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。
2． 色譜柱的再生
    長(zhǎng)期使用的色譜柱,，往往柱效會(huì)下降（柱子的理論塔板數(shù)減低）,。可以對(duì)色譜柱進(jìn)行再生,，在有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用一個(gè)廉價(jià)的泵進(jìn)行柱子的再生。
建議用來(lái)沖洗柱子的溶劑體積
色譜柱尺寸     柱體積     所用溶劑的體積
  125-4mm        1.6ml       30ml
  250-4 mm       3.2ml       60ml
  250-10mm       20ml        400ml
選擇再生方法：
    極性固定相（如Si,，NH2*  ,，DIOL基色譜填料）的再生：
    正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
    非極性固定相（如反相色譜填料RP－18，RP－8,，CN等）的再生： 水→乙腈→氯仿（或異丙醇）→乙腈→水
注意：
a. 在對(duì)NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí),，由于NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗,，然后再用水沖洗至堿溶液*流出,。
b. 0.05M稀硫酸可以用來(lái)清洗已污染的色譜柱,，如果簡(jiǎn)單的用有機(jī)溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效,。</P>
3. 色譜柱的維護(hù)
a．使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）
b．大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2－7.5,，盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍
c．避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化
d．流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理
e．如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈,，并保存于甲醇或乙腈中
f．氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性,，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類(lèi)溶劑,，以避免腐蝕