中藥有效成分常見(jiàn)色譜前處理方法

*步：提取法： 　　用相應(yīng)的溶劑使有效成分溶解出來(lái)的,，溶劑根據(jù)有機(jī)物的性質(zhì)來(lái)選擇,?？梢岳浣?，如果穩(wěn)定性允許,，為加速溶解的過(guò)程,，可采用超聲處理,，加熱回流（包括索氏提?。＿x擇適當(dāng)?shù)娜軇┛梢詼p少雜質(zhì),?；驹瓌t是能用純的甲、乙醇不用帶水的,，能用非極性的不用極性的,，因?yàn)橄龢O性雜質(zhì)一般比非極性的麻煩。根據(jù)相似相溶的原則,，非極性溶劑溶解的極性物質(zhì)較少,。　　蒸餾（多為水蒸氣蒸餾）也較多使用,，同時(shí)具有提取和一定的分離作用,。　　某些物質(zhì)還可以用升華法：樟腦,，咖啡堿（178℃以上就能升華而不被分解）等,。升華法易產(chǎn)生揮發(fā)性的焦油狀物，粘附在升華物上,，不易除去,，另外，升華不*,，甚至?xí)纸?，不能用于含量測(cè)定?！　?/p>

第二步：分離和純化：

1,、液液萃取　　基本上都是水溶后，用乙酸乙酯,、乙醚,、氯仿、石油醚等與水不相溶的有機(jī)溶劑,。一般分析的量較少,，微溶于水的物質(zhì)都可以用液液萃取的方法。通過(guò)合適的酸化/堿化步驟，可有效的去除雜質(zhì),。

2,、沉淀　　利用重金屬等與待分析物形成絡(luò)和物或難溶鹽沉淀而分離，然后再用酸,、堿等把它還原出來(lái),。鉛鹽常用以沉淀有機(jī)酸、氨基酸,、蛋白質(zhì),、粘液質(zhì)、鞣質(zhì),、樹(shù)脂,、酸性皂甙、部分黃酮等,。例如含綠原酸的溶液加醋酸鉛溶液,，攪拌使沉淀，離心,，棄去上清液,，沉淀物加5％硫酸溶液，用醋酸乙酯萃取,。常用雷氏銨鹽使生成生物堿沉淀析出,。橙皮甙、蘆丁,、黃芩甙均易溶于堿性溶液,，加入酸后可使之沉淀析出,。某些蛋白質(zhì),，可以變溶液的pH值利用其在等電點(diǎn)時(shí)溶解度zui小的性質(zhì)而使之沉淀析出。此外,，還可以用明膠,、蛋白溶液沉淀鞣質(zhì)；膽甾醇也常用以沉淀洋地黃皂甙等,。

3,、析出法：包括鹽析和改變?nèi)軇O性析出?！　←}析法是在水溶液中,、加入無(wú)機(jī)鹽，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出,，而與水溶性大的雜質(zhì)分離,。常用作鹽析的無(wú)機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂,、硫酸銨等,。三七皂甙乙、掌葉防己堿,，小檗堿等都可以用種方法,。不過(guò)，一般分析上是在水溶液中加入一定量的食鹽,，再用有機(jī)溶劑萃取,，例如麻黃堿、苦參堿等水溶性較大的物質(zhì),?！　「淖?nèi)軇O性析出是在溶液中加入不同極性的溶劑是物質(zhì)析出。就像生產(chǎn)中水提醇沉,、醇提水沉,。   

4、柱色譜法：　　常用的固定相有硅膠,、氧化鋁,、聚酰胺、大孔樹(shù)脂,、活性炭,、硅藻土等。柱色譜法有兩種,，是簡(jiǎn)單的吸附解吸,，理論塔板數(shù)相當(dāng)于一，跟萃取差不多,，也可稱(chēng)富集,，例如像現(xiàn)在用得很廣的SPE（solid phase extract）。另外一種則是像色譜Tswett那樣,，樣品加在柱上形成一窄帶,，然后再分步或連續(xù)洗脫?！　?種較簡(jiǎn)單,，活化后，按要求預(yù)處理,，然后讓樣品溶液通過(guò)吸附劑,，吸附飽和后，根據(jù)不同物質(zhì)的解吸條件,，選擇不同吸脫溶劑吸脫下來(lái),。關(guān)于SPE小柱的使用這里不介紹了,，僅舉一更實(shí)際的例子：取天麻細(xì)粉5g，加甲醇50ml,，水浴加熱回流1小時(shí),，過(guò)濾，濾液蒸干,，殘?jiān)铀?0ml溶解,，用氯仿萃取2次，每次10ml,，棄去氯仿液,。水液加熱揮去殘余氯仿，加活性炭（不活化）2g,，微沸20分鐘,，放冷，加硅藻土1g,，攪拌均勻,，用濾紙過(guò)濾，再以40ml水洗滌殘?jiān)?，濾液棄去,；殘?jiān)谒∩细稍锇胄r(shí)，然后置錐形瓶中,，加無(wú)水乙醇50ml,，回流半小時(shí)，過(guò)濾,，濾液濃縮至干,，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液,。其實(shí),，如果不是含量測(cè)定的話(huà)，上面的做法可以達(dá)到目的,。如果是含量測(cè)定,，那就要用柱子，并確定一下吸附劑的使用量,，防止待測(cè)物損失?！　〉诙N方法,，zui重要的是讓樣品在柱上形成窄帶。我們可以近似的認(rèn)為,，窄帶的高度相當(dāng)于理論塔板高度,，柱長(zhǎng)除以理論塔板高度就是理論塔板數(shù)了,。實(shí)際上洗脫時(shí)，待測(cè)成分在柱上的實(shí)際高度不一定等于窄帶的高度,。如果用洗脫劑直接溶解樣品,，就可以直接上柱了。如果不是的話(huà),，就要用一定的吸附劑吸附樣品,，在把樣品的溶劑揮干后，在加到柱子,。洗脫條件應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定,，包括洗脫溶劑、洗脫體積,、洗脫速度,。　　根據(jù)不同的吸附劑,，具體的應(yīng)用不同： （1）硅膠：硅膠顆粒表面有很多硅醇基,。硅膠吸附作用的強(qiáng)弱與硅醇基的含量多少有關(guān)。硅醇基能夠通過(guò)氫鍵作用吸附水分而降低吸附能力,，硅膠的吸附性根據(jù)其含水量不同分成多個(gè)級(jí)別,。硅膠的活化：100～110℃時(shí)，硅膠表面水分即能被除去,；500℃時(shí),，硅膠表面的硅醇基脫水縮合轉(zhuǎn)變?yōu)楣柩跬殒I，失去吸附性,。硅膠是酸性吸附劑,，用于中性或酸性成分分離。不活化的硅膠,，可利用分配原理分離色素,。硅膠又是一種弱酸性陽(yáng)離子交換劑，其表面上的硅醇基能釋放弱酸性的氫離子,，所以可作為離子交換劑,，分離堿性化合物。吸附硅膠柱的洗脫溶劑成很多,，從非極性到極性的順序洗脫,。 （2）氧化鋁：氧化鋁偏堿堿性，zui適宜用于生物堿類(lèi)的分離,，不宜用于醛,、酮、醋,、內(nèi)酯等類(lèi)型的化合物分離,。氧化鋁用水洗至中性,，稱(chēng)為中性氧化鋁，中性氧化鋁適用于酸性成分的分離,。氧化鋁用稀硝酸或稀鹽酸處理,，可使氧化鋁顆粒表面帶有硝酸根或氯離子，制成酸性氧化鋁,，酸性氧化鋁具有離于交換劑的性質(zhì),。中性氧化鋁使用zui多，柱層析用的中性氧化鋁粒度應(yīng)在100～200目之間,。粒度大,，分離效果差：小則洗脫速度慢，縱向擴(kuò)散,。中性氧化鋁的活化與硅膠差不多,。中性氧化鋁柱的洗脫溶劑溶劑組成很多，從非極性到極性的順序洗脫,。 （3）聚酰胺：尼龍與酰胺類(lèi)化合物形成的高分子聚合物,，分子上有很多酰胺基，可與酚類(lèi),、酸類(lèi),、醌類(lèi)、硝基化合物形成氫鍵,。適用于酚性化合物如黃酮的分離,。一般聚酰胺不需活化或預(yù)處理就可以裝柱。提取液或提取物上柱后,，用水洗雜質(zhì),，用不同比例的醇的水溶液從低濃度到高濃度依次洗脫。 （4）大孔樹(shù)脂：具有立體結(jié)構(gòu)的多孔性聚合物,，有巨大的比表面積,，通過(guò)范德華力吸附有機(jī)物。以前的大孔樹(shù)脂多用汽油等作致孔劑,，需要用丙酮加熱回流來(lái)預(yù)處理,，現(xiàn)在可購(gòu)買(mǎi)純度較高的，使用前只需用甲醇,、或乙醇洗滌至洗出液滴在水中不產(chǎn)生白色即可,。再生樹(shù)脂的方法是，用2%～5%的鹽酸浸泡洗滌,，用水洗到中性,，然后用5%氫氧化鈉浸泡洗滌，用水洗到中性即可,。樹(shù)脂含水量70%左右,，如不慎樹(shù)脂干了，可用乙醇或丙酮浸漬處理,，然后再用,。按實(shí)際情況，酸,、堿濃度可增減,。大孔樹(shù)脂類(lèi)型很多，zui多用的是D101,。多用于皂苷,、黃酮、內(nèi)酯,、萜類(lèi)和色素的分離,。提取液或提取物上柱后，用水洗雜質(zhì),，用不同比例的醇的水溶液從低濃度到高濃度依次洗脫,。 （5）活性炭：一般需要先用稀鹽酸洗滌，其次用乙醇洗,，再以水洗凈,，于80℃干燥后再用。上柱用的活性炭,，選用顆?；钭⑻浚魹榛钚蕴考?xì)粉,，則需加入適量硅藻土作為助濾劑一并裝柱,，以免流速太慢?；钚蕴恐饕矣诜蛛x水溶性成分,。活性炭對(duì)芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物,，對(duì)大分子化合物的吸附力大于小分子化合物,。可將水溶性芳香族物質(zhì)與脂肪族物質(zhì)分開(kāi),，單糖與多糖分開(kāi),，氨基酸與多肽分開(kāi)。提取液或提取物上柱后,，用水洗雜質(zhì),，用不同比例的醇的水溶液從低濃度到高濃度依次洗脫。 （6）硅藻土：采用不同pH緩沖液的硅藻土分配色譜柱,，可分離生物堿,、酸性生物堿和中性物質(zhì),。提取液或提取物上柱后，用乙醚或氯仿洗下色素,、脂肪,、中性雜志，然后用胺性醇洗下生物堿,。 　　 十八烷基硅烷基硅烷堿合硅膠,、其它類(lèi)型鍵合硅膠、DEAE纖維素,、其他纖維素,、離子交換樹(shù)脂應(yīng)用的較少，這里略去,。