1 液相色譜儀系統(tǒng)
液相色譜儀主要由貯液瓶,、泵,、進樣器、柱子,、柱溫箱,、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成,。對于整個系統(tǒng)而言,，柱子、泵和檢測器是核心部件同時也是易出問題的主要部位,。
2 常見問題及解決方法
液相作為一種高精密儀器,，如果在使用過程中不按照正確操作的話，就容易導(dǎo)致一些問題,。其中zui常見的就是柱壓問題,、漂移問題、峰型異常問題,。
2.1 柱壓問題柱壓問題是使用液相色譜過程中需要密切注意的地方,，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效,、分離效果及保留時間等密切相關(guān),。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在50PSI（3.3 Bar）之間（在使用梯度洗脫時，柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的）,。壓力過高,、過低都屬于柱壓問題。
2.1.1 壓力過高 這是液相在使用中zui常見的問題,，指的是壓力突然升高,，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時,，我們應(yīng)該分段進行檢查,。
（1）.首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體,，使PEEK管低于溶劑瓶,，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞,。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個小時,，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下,，溶劑過濾頭正常,，在檢查；
（2）.打開Purge閥,，使流動相不經(jīng)過柱子,，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞,。處理方法：將過濾白頭取出,，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI （6.7 Bar）以下,，過濾白頭正常,，在檢查；
（3）.把色譜柱出口端取下,，如果壓力不下降，則是柱子堵塞,。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞,，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞,，則要用比現(xiàn)在流動相更強的流動相沖至壓力正常,。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上,，用流動相沖洗柱子,。這時，如果柱壓仍不下降,，只有換柱子入口篩板,，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降,，所以盡量少用,。
2.1.2 壓力過低壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個接口處,，特別是色譜柱兩端的接口,，把泄漏的地方旋緊即可。當(dāng)然還有一個原因就是泵里進了空氣,，但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn),，忽高忽低，更嚴(yán)重一點會導(dǎo)致泵無法吸上液體。處理方法：打開Purge閥,，用3~5ml/min的流速沖洗,，如果不行，則要用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出,。
2.2 漂移問題 主要包括基線漂移和保留時間漂移,。
2.2.1基線漂移 一般說來，機器剛起動時,，基線容易漂移,，大概要半個小時的平衡時間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽,，還有就是在低波長下（220nm）平衡時間相對會比較長,，但如果你在實驗過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因：
1,、柱溫波動,。解決方法：控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱,。
2,、流通池被污染或有氣體。 解決方法：用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池（斷開柱子）,。如有需要,，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。
3,、紫外燈能量不足,。解決方法：更換新的紫外燈
4、流動相污染,、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成,。解決方法：檢查流動相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑,。
5,、樣品中有強保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線,。解決方法：使用保護柱,，如有必要，在進樣之間,。在分析過程中,，定期用強溶劑沖洗柱子。
6,、檢測器沒有設(shè)定在zui大吸收波長處,。解決方法：將波長調(diào)整至zui大吸收波長處
7,、流動相的PH值沒有調(diào)節(jié)好。解決方法：加適量的酸或堿調(diào)至*PH值
2.2.2保留時間漂移 保留時間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個重要標(biāo)志,，同一種東西,，兩次的保留時間相差不要超過15s，超過了半分鐘可看做保留時間漂移,，就無法進行定性,，你要考慮以下原因：
1、溫控不當(dāng),。解決方法：調(diào)好柱溫,，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。
2,、流動相比例變化,。解決方法：檢查四元泵的比例閥是否有故障
3、色譜柱沒有平衡,。解決方法：在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱
4,、流速變化。解決方法：重新設(shè)定流速
5,、泵中有氣泡,。解決方法：、從泵中除去氣泡
2.3 峰型異常問題 峰型問題是液相的主要問題,，在做液相過程中,，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰,，要區(qū)別對待，從主要問題出發(fā),，一個一個加以解決,。
1、色譜圖中未出峰,。解決方法：系統(tǒng)未進樣或樣品分解,；泵未輸液或流動相使用不正確；檢測器設(shè)置不正確,；針對以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可,。
2、一個峰或幾個峰是負(fù)峰,。解決方法：流動相吸收本底高,；進樣過程中進入空氣；樣品組分的吸收低于流動相,。
3,、所有峰均為負(fù)峰,。解決方法：信號電纜接反或檢測器輸出極性設(shè)置顛倒；光學(xué)裝置尚未達到平衡,。
4,、所有峰均為寬峰。解決方法：系統(tǒng)未達到平衡,；溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多,；色譜柱尺寸及類型選擇不正確；色譜柱或保護柱被污染或柱效降低,；溫度變化造成的影響,。 、
5,、所出峰比預(yù)想的小,。解決方法：樣品黏度過大；進樣品故障或進樣體積誤差,；檢測器設(shè)置不正確．定量環(huán)體積不正確,；檢測池污染；檢測器燈出現(xiàn)問題,。
6,、出現(xiàn)雙峰或肩峰。解決方法：進樣量過大,；樣品濃度過高,；保護柱或色譜柱柱頭堵塞；保護拄或色譜柱污染或失效,；柱塌陷或形成短通道,。
7、前伸峰,。解決方法：進樣量或樣品濃度高,；溶解樣品的溶劑較流動相極性強；保護柱或色譜柱污染或失效,。
8,、拖尾峰。解決方法：柱超載,，降低樣品量,；增加柱直徑采用較高容量的固定相；峰干擾,，對樣品進行清潔過濾,；調(diào)整流動相；硅羥基作用,，加入三乙胺,，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相pH值,；柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效，更換燒結(jié)不銹鋼,；加在線過濾器,，對樣品進行過濾；死體積或柱外體積過大,，將連接點降至zui低,；盡可能使用內(nèi)徑較細(xì)的連接管；柱效下降,，更換柱子,；采用保護柱，對柱子進行再生,。
9,、出現(xiàn)平頭峰。解決方法：檢測器設(shè)置不正確,；進樣體積太大或樣品濃度太高,。
10、出現(xiàn)鬼峰,。解決方法：進樣閥殘余峰,，在每次進完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統(tǒng)；樣品中存在未知物,，改進樣品的預(yù)處理,；流動相污染，更換新流動相,，盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用,，隔夜的流動相再次使用時要過濾；盡可能使用HPLC級試劑,；流路中有小的氣泡,，打開Purge閥，加大流速排除,。