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超聲波細(xì)胞粉碎儀破碎細(xì)胞問題匯總
閱讀：2927 發(fā)布時(shí)間：2012-4-1超聲波細(xì)胞粉碎儀破碎細(xì)胞問題匯總
大腸桿菌表達(dá)外源蛋白，在超聲破碎的時(shí)候,，用含有1%triton-X-100的PBS懸浮,，然后超聲的效果較好,，1%triton-X-100的作用還是很明顯的,，對(duì)其他的一些細(xì)菌同樣起作用,，比如鏈霉菌。
細(xì)菌沉淀直接加樣品1buffer,，再加5ul的巰基乙醇,，混勻，離心,，煮沸10min,，直接上樣，染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min（下次適當(dāng)補(bǔ)點(diǎn)醋酸即可）,將染色液換成大量的水（自來水即可）在微波爐煮10min 就可以.
在表達(dá)重組蛋白后超聲波細(xì)胞粉碎儀破碎細(xì)胞,，采用冰浴,，400w，破2s停1s,，但是不一會(huì)就產(chǎn)生大量泡沫,，影響了破碎功率,，pbs和tris緩沖液都是這樣,，zui后都是破碎不*,，而我的目的蛋白就在這些未破碎的細(xì)胞中。
1,、會(huì)產(chǎn)生氣泡是因?yàn)槟愕奶筋^位置沒放好,。探頭一定要接近底部，約1cm（我一般是距底部0.5mm）,。功率根據(jù)超聲波細(xì)胞粉碎儀不同會(huì)有所不同,，但你可以觀察液面，有波動(dòng)但不要太劇烈就好,。
2,、破3S停10S，破個(gè)二三十次看看,。
3,、超聲波細(xì)胞粉碎儀的變幅桿位置擺放也要注意，聽聲音如果不對(duì)的話就要及時(shí)調(diào)整,。另外可以從菌濃度方面考慮,。 在破碎時(shí)試著加大體積,強(qiáng)度不要超過60%.
4、嘗試超8s停8s,對(duì)有些菌體蛋白來說,，你的方法很難散熱,，導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡，停頓時(shí)間稍長一些,，這種情況多見于包涵體形式的蛋白,。
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