高效液相色譜的常見(jiàn)問(wèn)題有：
1,、渦流擴(kuò)散
流動(dòng)相碰到較大的固體顆粒,，就像流水碰到石頭一樣產(chǎn)生渦流。如果柱裝填得不均勻,，有的部分松散或有細(xì)溝,，則流動(dòng)相的速度就快;有的部位結(jié)塊或裝直緊密則流就慢，多條流路有快有慢,，就使區(qū)帶變寬,。因此，固相載體的顆粒要小而均勻,，裝柱要松緊均一,，這樣渦流擴(kuò)散小，柱效率高,。
2,、分子擴(kuò)散
分子擴(kuò)散就是物質(zhì)分子由濃度高的區(qū)域向濃度低的區(qū)域運(yùn)動(dòng)，也稱(chēng)縱向分子擴(kuò)散,。要減少分子擴(kuò)散就要采用小而均勻的固相顆粒裝柱,。同時(shí)在操作時(shí)，如果流速太慢,，被分離物質(zhì)停留時(shí)間長(zhǎng),，則擴(kuò)散嚴(yán)重。
3,、質(zhì)量轉(zhuǎn)移
被分離物質(zhì)要在流動(dòng)相與固定相中平衡,，這樣才能形成較窄的區(qū)帶。在液相色譜中,，溶質(zhì)分子要在兩個(gè)液相之間進(jìn)行分配,，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的時(shí)間。當(dāng)流速快時(shí),，轉(zhuǎn)移速度慢,，來(lái)不及達(dá)到平衡動(dòng)相就向前移，這各物質(zhì)的非平衡移動(dòng),，使區(qū)帶變寬,。
4、動(dòng)相流速
當(dāng)流速太低時(shí),，分子擴(kuò)散嚴(yán)重,，特別是在氣相色譜中尤為突出,。如將理論塔板高度對(duì)流速作圖，理論塔板高度隨流速增加而急速下降,，當(dāng)達(dá)到低值時(shí),，流速再加大則質(zhì)量轉(zhuǎn)移起主要作用，理論塔板高度又加大,。在高效液相色譜中,，流速稍快影響不大，但在凝膠過(guò)濾色譜中,，因?yàn)槲镔|(zhì)要滲透到凝膠內(nèi)部,，所以質(zhì)量轉(zhuǎn)移影響大，流速咖大會(huì)降低柱效率,。
5,、固定相顆粒大小
定相顆粒越小柱效率越高，對(duì)流動(dòng)相流動(dòng)的阻力越大,，需要加大壓力才能使它流動(dòng),。
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