高效液相色譜的常見問題有：
1,、渦流擴散
流動相碰到較大的固體顆粒，就像流水碰到石頭一樣產(chǎn)生渦流,。如果柱裝填得不均勻,，有的部分松散或有細溝，則流動相的速度就快;有的部位結(jié)塊或裝直緊密則流就慢,，多條流路有快有慢,，就使區(qū)帶變寬。因此,，固相載體的顆粒要小而均勻,，裝柱要松緊均一，這樣渦流擴散小,，柱效率高,。
2、分子擴散
分子擴散就是物質(zhì)分子由濃度高的區(qū)域向濃度低的區(qū)域運動,，也稱縱向分子擴散,。要減少分子擴散就要采用小而均勻的固相顆粒裝柱。同時在操作時,，如果流速太慢,，被分離物質(zhì)停留時間長,，則擴散嚴重。
3,、質(zhì)量轉(zhuǎn)移
被分離物質(zhì)要在流動相與固定相中平衡,，這樣才能形成較窄的區(qū)帶。在液相色譜中,，溶質(zhì)分子要在兩個液相之間進行分配,，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的時間。當流速快時,，轉(zhuǎn)移速度慢,，來不及達到平衡動相就向前移，這各物質(zhì)的非平衡移動,，使區(qū)帶變寬,。
4、動相流速
當流速太低時,，分子擴散嚴重,，特別是在氣相色譜中尤為突出。如將理論塔板高度對流速作圖,，理論塔板高度隨流速增加而急速下降,，當達到低值時，流速再加大則質(zhì)量轉(zhuǎn)移起主要作用,，理論塔板高度又加大,。在高效液相色譜中，流速稍快影響不大,，但在凝膠過濾色譜中,，因為物質(zhì)要滲透到凝膠內(nèi)部，所以質(zhì)量轉(zhuǎn)移影響大,，流速咖大會降低柱效率,。
5、固定相顆粒大小
定相顆粒越小柱效率越高,，對流動相流動的阻力越大,，需要加大壓力才能使它流動。
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