臺(tái)式高速離心機(jī)的密度梯度離心法:可以同時(shí)使樣品中幾個(gè)或全部組份分離,,具有很好的分辨率,。
1)速率區(qū)帶法(rate zonal):
根據(jù)樣品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S),。大致步驟如下:
在離心管中裝入密度梯度溶液,溶液的密度從離心管頂部至底部逐漸增加(正梯度),。
將所需分離的樣品小心地加至密度梯度溶液的頂部,。樣品在梯度溶液表面形成一負(fù)梯度。
由于不同大小的粒子在離心力作用下,,在梯度中移動(dòng)的速度不一樣,,所以經(jīng)過離心后會(huì)形成幾條分開的樣品區(qū)帶。
注意:樣品粒子的密度必須大于梯度液注中任一點(diǎn)的密度,。離心過程必須在區(qū)帶到達(dá)管子底部前停止,。
2)等密度離心法(isopycnic):
根據(jù)粒子的不同密度來(lái)分離。離心過程中,,粒子會(huì)移至與它本身密度相同的地方形成區(qū)帶,。
密度樣度的選擇要使梯度的范圍包括所有待分離粒子的密度。樣品可以在密度梯度液粒上面或均勻分布在密度梯度中,。經(jīng)離心后,,樣品粒子達(dá)到它們的平衡點(diǎn)。注意:平衡后粒子的分離*由其密度決定,,與時(shí)間無(wú)關(guān),,此時(shí)再改變離心轉(zhuǎn)速,只能改變區(qū)帶的相對(duì)位置,。
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