人白細胞介素-10（IL-10）ELISA試劑盒使用說明書

使用前仔細閱讀本說明書,。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,，來檢測人白細胞介素-10（IL-10），只能用于研究用途,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。

用    途： 用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細胞介素-10（IL-10）的測定,。

工作原理

本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人白細胞介素-10（IL-10）的水平,。向預(yù)先包被了人白細胞介素-10（IL-10）單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入白細胞介素-10（IL-10），溫育,；洗滌后,，加入HRP標(biāo)記過的白細胞介素-10（IL-10）抗體。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶,，然后加入底物A、B,，產(chǎn)生藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人白細胞介素-10（IL-10）的濃度呈正相關(guān),。

試劑盒組成 

需要而未提供的試劑和器材

• 37℃恒溫箱,。
• 標(biāo)準規(guī)格酶標(biāo)儀。
• 精密移液器及一次性吸頭
• 蒸餾水,，
• 一次性試管
• 吸水紙

注意事項

• 從2-8℃取出的試劑盒,，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
• 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差
• 建議所有標(biāo)準品,、樣本都做雙份檢測。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再按說明書操作進行測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
• 嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.
• 為避免交叉污染,，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
• 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
• 底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要,，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機,，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標(biāo)本要求 

1．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作程序

• 標(biāo)準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：

• 分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準品孔、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品孔中加入稀釋好的標(biāo)準品50μl,；在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。輕輕晃動混勻,，37℃溫育30分鐘。   
• 棄去液體,，甩干,，每孔加滿30倍稀釋后洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,，拍干,。
• 每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。輕輕晃動混勻,，37℃溫育30分鐘。  
• 棄去液體,，甩干,，每孔加滿30倍稀釋后洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。如此重復(fù)5次，拍干,。
• 每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
• 取出酶標(biāo)板,，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
• 測定：以空白孔調(diào)零,，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
• 根據(jù)標(biāo)準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,，其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

操作程序總結(jié)：

準備試劑,，樣品和標(biāo)準品 

加入準備好的樣品和標(biāo)準品,，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板5次，加入酶標(biāo)試劑,，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板5次,，加入顯色液A、B,，37℃顯色10分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計算

檢測范圍：5ng/L→250ng/L,。

規(guī)格：    96人/盒

保存：    2-8℃ 

有效期：  6個月（2-8℃）。

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