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廈門慧嘉生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第10年

18906011628

人組織多肽抗原 TPA ELISA試劑盒

時(shí)間:2016/4/8閱讀:88
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人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱:

通用名:人組織多肽抗原(TPA)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒

使用目的

本試劑盒用于測(cè)定人血清,、血漿,、或其它相關(guān)組織液中組織多肽抗原(TPA))含量,。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本組織多肽抗原(TPA)水平,。用純化的人抗-組織多肽抗原包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入組織多肽抗原(TPA),再與HRP標(biāo)記的羊抗人抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人組織多肽抗原(TPA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品人組織多肽抗原(TPA)濃度,。

試劑盒組成

1

20倍濃縮洗滌液

50ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1瓶

8

標(biāo)準(zhǔn)品(180U/L)

0.5ml×1瓶

3

標(biāo)包被

12孔×8條

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個(gè)

標(biāo)本要求 

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

3.可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

操作步驟

  • 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,,然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻,;然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,,混勻;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,,濃度分別為120 U/L,,80 U/L ,40 U/L,,20 U/L,,10 U/L
  • 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同),、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻,。
  • 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
  • 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。
  • 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
  • 溫育:操作同3,。
  • 洗滌:操作同5。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  • 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
  • 測(cè)定:以空白空調(diào)零,,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值) 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

 

計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),,OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo)),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),,即為樣品的實(shí)際濃度,。

注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,,洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,,以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。

  • 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔OD值的1.5倍),,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
  • 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染。

6.底物請(qǐng)避光保存,。

7.嚴(yán)格按說明書的操作進(jìn)行,,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn),。

檢測(cè)范圍:

10 U/L -150 U/L

規(guī)格:

96人份/盒

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:,;2-8,。

2.有效期:6個(gè)月

 

 

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