日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

廈門(mén)慧嘉生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第10年

18906011628

人卵清蛋白特異性IgE OVA sIgE ELISA試劑盒

時(shí)間:2016/4/6閱讀:116
分享:

人卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用

預(yù)期應(yīng)用

ELISA法定量測(cè)定人血清,、血漿或其它相關(guān)液體中OVA sIgE含量,。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本OVA sIgE水平,。用純化的抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入OVA sIgE,、生物素化的抗豚鼠OVA sIgE抗體,、HRP標(biāo)記的親和素,,經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的OVA sIgE呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),,計(jì)算樣品濃度,。

試劑盒組成及試劑配制 

  • 酶聯(lián)板:一塊(96孔) 
  • 標(biāo)準(zhǔn)(凍干品)2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,,蓋好后靜置10分鐘以上,,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,,其濃度為280 ng/mL,做系列倍比稀釋后,,分別稀釋成280 ng/mL,,140 ng/mL ,70 ng/mL,,35 ng/mL,,17.5 ng/mL,8.25 ng/mL,,4.12 ng/mL,,其原液直接作為zui高標(biāo)準(zhǔn)濃度,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ng/mL,,臨用前15分鐘內(nèi)配制,。

如配制140 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml 280 ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,,其余濃度以此類(lèi)推,。

  • 樣品稀釋液:1×20ml/
  • 檢測(cè)稀釋液A1×10ml/,。
  • 檢測(cè)稀釋液B1×10ml/,。
  • 檢測(cè)溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋?zhuān)♂屒案鶕?jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100ul),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml,。如1ul檢測(cè)溶液A加99ul檢測(cè)稀釋液A的比例配制,,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制,。
  • 檢測(cè)溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液B1:100稀釋,。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。
  • 底物溶液:1×10ml/瓶,。
  • 洗滌液1×30ml/瓶,,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
  • 終止液1×10ml/瓶(2N H2SO4),。

標(biāo)本的采集及保存 

1.血清:標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘,,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,,或將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注:標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè),。

4. 組織勻漿: 將動(dòng)物的組織標(biāo)本先用PBS洗滌,去除多余血液,勻漿化后放在20mlPBS中于-20° C放置過(guò)夜,第二天,經(jīng)過(guò)二次反復(fù)凍融破膜,將勻漿物5000x g離心5分鐘,取上清即可檢測(cè),。

 

操作步驟

各試劑在使用前平衡至室溫。

  • 加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔。除空白孔外,,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)樣品100ul,,注意不要有氣泡,輕輕混勻,,酶標(biāo)板加上蓋,,37反應(yīng)120分鐘
  • 棄去液體,,甩干,,不用洗滌。
  • 每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100ul,,37℃,60分鐘,。洗板3次,350ul/每孔,,甩干,。
  • 每孔加檢測(cè)溶液B工作液 100ul,37,,60分鐘,,洗板5次,甩干,。
  • 依序每孔加底物溶液90ul37℃避光顯色30分鐘(此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,,后3-4孔梯度不明顯),。
  • 依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(yīng)(此時(shí)蘭色立轉(zhuǎn)黃色),。用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值),。 

1. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4,。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。

2.為防止樣品蒸發(fā),,試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),。

洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層水紙,,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,;將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi),,浸泡1-2分鐘根據(jù)需要,,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次,。
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,。

特異性

    本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的豚鼠OVA sIgE,,且與其它相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。

計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),,OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo)),,在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,,計(jì)算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度,。

注意事項(xiàng)

  • 洗滌過(guò)程非常重要,,不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
  • 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣。
  • 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,做復(fù)孔,。
  • 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù),。

5.在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí),,請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,,不能混淆。

6.底物請(qǐng)避光保存,。

檢測(cè)范圍:

4.12 ng/mL -280 ng/mL

說(shuō)明

1.試劑盒保存:-20(較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)),;2-8(頻繁使用時(shí))。

2.有效期:6個(gè)月

3.濃洗滌液會(huì)有鹽析出,,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,。

4.剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響,。

5.中、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不一致之處,,請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),。

 

 

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功,!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言