人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清,，血漿及其它相關液體樣本中人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)含量,。

實驗原理

本試劑盒應用間接法測定標本中人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)水平。用純化的人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)標準品和未知濃度的血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)待檢樣品，溫育后,，加入生物素標記的抗IgG抗體,，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)濃度,。 

試劑盒組成 

標本要求 

1．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

操作步驟

• 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔,。
• 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）,、標準品孔,、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl,，在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育45分鐘,。
• 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復4次,，拍干。
• 加生物素標記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl,。37℃溫育30分鐘
• 洗滌：操作同4,。
• 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
• 洗滌：操作同4,。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。 

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

• 如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。
• 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。

線形范圍：

30pg/ml-1000pg/ml

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

2．有效期：6個月