20 
 
6,、  顯色：為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液?？稍诩尤氲孜锶?br />液后每隔一段時(shí)間觀察一下顯色情況以控制反應(yīng)時(shí)間（比如每隔 10 分鐘）,。當(dāng)肉眼可見標(biāo)
準(zhǔn)品前 3-4 孔有明顯梯度藍(lán)色，后 3-4 孔顯色不明顯時(shí),，即可加入終止液終止反應(yīng),，此時(shí)
藍(lán)色立刻變?yōu)辄S色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同,。 
7,、  底物溶液應(yīng)為淺藍(lán)色或無色，如果顏色嚴(yán)重變深則必須棄用,。底物溶液易受污染,，請(qǐng)避光
妥善保存。 
【數(shù)據(jù)處理】 
可將標(biāo)準(zhǔn)品及樣本值減去 S0 孔數(shù)值后繪制曲線,，如果設(shè)置復(fù)孔,，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)
準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)）,，OD 值為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)）,，在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲
線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析,，可從我們的下載專業(yè)軟件"Curve Expert 1.3",，
并根據(jù)提示制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣本 OD 值,，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；或用標(biāo)準(zhǔn)品的濃度
與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,，將樣本的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣本濃度,。若樣
本檢測(cè)前進(jìn)行過稀釋,，zui后計(jì)算時(shí)需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為樣本的實(shí)際濃度,。 
【說明】 
1,、  本試劑盒僅供研究使用。 
2,、  中,、英文說明書可能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說明書為準(zhǔn),。 
3,、  本操作說明也適用于 48T 試劑盒。48T 試劑盒中酶標(biāo)板,、標(biāo)準(zhǔn)品,、生物素標(biāo)記抗體及辣根
過氧化物酶標(biāo)記親和素?cái)?shù)量減半。 
4,、  不同批號(hào)試劑不能混用,。不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 
5,、  剛開啟的酶標(biāo)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),，此為正常現(xiàn)象,，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何
影響19 
 
【操作步驟】 
1,、  將各種試劑移至室溫（18-25℃）平衡至少 30 分鐘,，按前述方法配制試劑,，備用。 
2,、  加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測(cè)樣本孔。每孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本 100μl,，輕輕晃動(dòng)混
勻,，覆上板貼，37℃溫育 2 小時(shí),。 
3,、  棄去液體，甩干,，不用洗滌,。 
4,、  每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl，覆上新的板貼,，37℃溫育 1 小時(shí),。 
5、  棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板 3 次。每次浸泡 2 分鐘,，200μl/每孔,，甩干。   
6,、  每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液 100μl,，覆上新的板貼，37℃溫育 1 小時(shí),。 
7,、  棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板 5 次,。每次浸泡 2 分鐘，200μl/每孔,，甩干,。 
8、  依序每孔加底物溶液 90μl,，37℃避光顯色 15-30 分鐘,。 
9、  依序每孔加終止溶液 50μl,，終止反應(yīng),。 
10、 在反應(yīng)終止后 5 分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD 值）,。   
【操作要點(diǎn)】 
1,、  為保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，建議標(biāo)準(zhǔn)品及樣本均設(shè)雙孔測(cè)定,。每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。 
2、  如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高,，請(qǐng)先用樣本稀釋液進(jìn)行稀釋,，以使樣本符合試劑盒的檢測(cè)范
圍，zui后計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。 
3,、  加樣：加樣時(shí),，請(qǐng)使用一次性的潔凈吸頭，避免交叉污染,。加樣時(shí)應(yīng)盡量輕緩,，避免起泡，
將樣本加于酶標(biāo)板孔底部,，切勿沿孔壁加樣,。一次加樣時(shí)間控制在 10 分鐘內(nèi)，如標(biāo)
本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。 
4、  溫育：為防止樣本蒸發(fā)或污染,，溫育過程中酶標(biāo)板必須覆上板貼,，實(shí)驗(yàn)過程中酶標(biāo)板應(yīng)避
免處于干燥的狀態(tài)。溫育過程中應(yīng)隨時(shí)觀察溫箱溫度是否恒定于 37℃,，及時(shí)調(diào)整,。溫育
過程中，溫箱不易開啟太多次,，以免影響溫度平衡,。 
5、  洗滌：洗滌過程非常重要,，不充分的洗滌易造成假陽性,。 
(1)  手工洗板方法：吸去（不可觸及孔壁和孔底）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪
墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,；將推薦的洗滌緩沖液按 200μl/孔注入孔內(nèi)，
浸泡 2 分鐘,。根據(jù)操作步驟中所述,，重復(fù)此過程數(shù)次。 
(2)  自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中,。 18 
 
3,、  生物素標(biāo)記抗體工作液 
    生物素標(biāo)記抗體液按1:100倍用生物素標(biāo)記抗體稀釋液進(jìn)行稀釋,。如10μl生物素標(biāo)記抗體加
990μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液，輕輕混勻,，在臨用*分鐘內(nèi)配妥,。 
4、  辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液 
    辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素按1:100倍用辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液進(jìn)行稀釋,。如
10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液,，輕輕混勻,，在臨用
*分鐘內(nèi)配妥。 
【重要提示】    
1,、  實(shí)驗(yàn)開始前,，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭Ｔ噭┗驑颖鞠♂寱r(shí),，均需混勻,，混勻時(shí)盡量避免起
泡。 
2,、  用戶在初次使用試劑盒時(shí),，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便管蓋和管壁上的液體集中到
管底,。 
3,、  在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí),，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆。 
4,、  因?qū)嶋H裝量多于標(biāo)示裝量,，配制工作試劑請(qǐng)用的計(jì)量工具（移液槍或量筒等）量取，
切勿不經(jīng)量取直接使用,。 
5,、  標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液,、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算
好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制,，實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.4ml。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過
的標(biāo)準(zhǔn)品,、生物素標(biāo)記抗體工作液,、或辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。 
6,、  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋請(qǐng)勿于板中進(jìn)行,，標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)于臨用前 15 分鐘內(nèi)配制。為保證實(shí)驗(yàn)有效性,，
建議每次實(shí)驗(yàn)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品,。若保存得當(dāng)，溶解后的標(biāo)準(zhǔn)品 S7 可在 2-8℃保存,，7 天內(nèi)
使用有效,。 
 
 
 
 
 17 
 
或?qū)⑸锨宸盅b保存于-20°C 或-80°C。解凍后的樣品應(yīng)再次離心,，然后檢測(cè),。避免反復(fù)凍
融,。 
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè),。 
【試劑配制】 
1,、  標(biāo)準(zhǔn)品 
(1)  從試劑盒中取出一支標(biāo)準(zhǔn)品，于 6000-10000rpm 離心 30 秒,。用 1ml 樣本稀釋液溶解,，并
用槍頭對(duì)準(zhǔn)凍存管底部反復(fù)吸打 5 次以助溶解，充分混勻得到標(biāo)準(zhǔn)品 S7,，放置備用,。 
(2)  取 7 個(gè) 1.5  ml 離心管(S0-S6)依次排列，各加入 250µl 樣本稀釋液,。吸取 250µl 標(biāo)準(zhǔn)品
S7 到*個(gè)離心管中(S6),，輕輕吹打混勻。從 S6 中吸取 250µl 到第二個(gè) EP 管中(S5),，
輕輕吹打混勻,。以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋。S0 為樣本稀釋液,。 
 
 
 
 
 
 
 
【標(biāo)準(zhǔn)品濃度】 
編號(hào)  S7  S6  S5  S4  S3  S2  S1  S0 
pg/ml  4000  2000  1000  500  250  125  62.5  0 
 
2,、  洗液工作液 
濃洗滌液按1:25倍用去離子水進(jìn)行稀釋。例如用量筒量取240ml去離子水,，倒入燒杯或其
他潔凈容器中,，再量取10ml濃洗滌液，均勻加入,，攪拌混勻,，在臨用前配妥。濃洗滌液低溫保
存會(huì)有鹽析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,。 
 16 
 
【存儲(chǔ)條件及有效期】 
未開封試劑盒 
試劑盒避光保存于2-8℃。有效期為六個(gè)月,。 
請(qǐng)?jiān)谠噭┖袠?biāo)注的有效日期內(nèi)使用,。 
開封試劑盒 
預(yù)包被的酶標(biāo)板 
酶標(biāo)板打開后應(yīng)置有干燥劑的鋁箔袋中置
于 2-8℃密封防潮保存。有效期內(nèi) 2-8℃條
件下zui多可保存一個(gè)月,。 
標(biāo)準(zhǔn)品 
有效期內(nèi)2-8℃條件下zui多可保存一個(gè)月,。
若近期不使用，保存在-20°C,。 
生物素標(biāo)記抗體 
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素 
生物素標(biāo)記抗體稀釋液 
有效期內(nèi)2-8℃條件下zui多可保存一個(gè)月,。 
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素
稀釋液 
樣本稀釋液 
濃洗滌液 
底物溶液 
終止液 
【所需試劑和器材】 
標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀；高速離心機(jī),；電熱恒溫培養(yǎng)箱,；干凈的試管和離心管；容量瓶,； 
系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,；多通道移液器；蒸餾水 等 
【樣本采集及保存】 
1,、  血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置 2 小時(shí)或 4°C 過一夜后于 2 - 8°C 1000 x g 離心 15 分鐘,，取
上清即可立即檢測(cè)；或進(jìn)行分裝,，并將標(biāo)本放于-20°C 或-80°C 保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
解凍后的樣品應(yīng)再次離心,，然后檢測(cè),。 
2、  血漿：可用 EDTA 或肝素作為抗凝劑,，標(biāo)本采集后 30 分鐘內(nèi)于 2 - 8°C 1000 x g 離心 15
分鐘,，取上清即可立即檢測(cè)；或進(jìn)行分裝,，并將標(biāo)本放于-20°C 或-80°C 保存,，但應(yīng)避免
反復(fù)凍融。解凍后的樣品應(yīng)再次離心,，然后檢測(cè),。 
3、  組織裂解液：取 100mg 組織,，用 1X PBS 洗去血污,。剪成小塊放入組織研磨器（勻漿管）
中，加入 1 ml 1X PBS,，制成勻漿,，然后置于-20°C 過一夜。經(jīng)過反復(fù)凍融 2 次處理破壞細(xì)
胞膜后,，將組織勻漿于 2 - 8°C 5000 x g 離心 5 分鐘取上清,。取適量上清液立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，15 
 
人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體 1 (sLOX-1) 
酶聯(lián)免疫試劑盒使用說明書 
【產(chǎn)品編號(hào)】CSB-E13567h   
【預(yù)期應(yīng)用】ELISA 法定量測(cè)定人血清,、血漿,、組織裂解液中 sLOX-1 含量。 
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 
1,、  檢測(cè)范圍：62.5 pg/ml-4000 pg/ml 
2,、  靈敏度：15.6 pg/ml 
3、  精密度：批內(nèi)差 CV%<8%，批間差 CV%<10% 
4,、  特異性：本試劑盒特異性檢測(cè)人 sLOX-1,，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。 
【實(shí)驗(yàn)原理】 
用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體,，往包被抗 sLOX-1 抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)
準(zhǔn)品、生物素化的抗 sLOX-1 抗體,、HRP 標(biāo)記的親和素,，經(jīng)過*洗滌后用底物 TMB 顯色。
TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣
本中的 sLOX-1 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，計(jì)算樣本濃度,。 
【試劑盒組成成分】 
組份  96T 
酶標(biāo)板  (Assay plate)  12 條×8 孔 
標(biāo)準(zhǔn)品  (Standard)  2 瓶  (凍干品) 
生物素標(biāo)記抗體  (Biotin-antibody)    1 x 120 μl/瓶  (100×) 
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素  (HRP-avidin)    1 x 120 μl/瓶  (100×) 
生物素標(biāo)記抗體稀釋液  (Biotin-antibody Diluent)  1 x 15 ml/瓶 
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液  (HRP-avidin Diluent)  1 x 15 ml/瓶 
樣本稀釋液  (Sample Diluent)  1 x 50 ml/瓶 
濃洗滌液  (Wash Buffer)    1 x 20 ml/瓶  (25×) 
底物溶液  (TMB Substrate)  1 x 10 ml/瓶 
終止液  (Stop Solution)  1 x 10 ml/瓶 
板貼  4